试验八细胞融合-小鼠骨髓瘤sp20细胞及小鼠脾细胞融合.ppt

实验八 细胞融合 ----- 小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞与小鼠脾细胞融合 一、实验目的 了解细胞融合的原理 掌握细胞融合的基本方法 细胞融合的概念 二、实验原理 病毒诱导融合 聚乙二醇诱导融合 电场诱导融合 激光诱导融合 常用的诱导融合手段有哪些？ 二、实验原理 细胞融合的概念 三、仪器、材料与试剂 仪器： 离心机、 CO 2 培养箱、超净台、 37 ℃恒温水浴 锅、显微镜、血球计数板、解剖器械、烧杯、载玻 片、盖玻片、离心管。 材料： SP2/0 细胞、昆明小鼠 试剂： Hanks 液、 45%PEG ， 75% 乙醇 四、实 验步骤 （ 1 ） 小鼠摘眼球放血（可不做） , 拉颈 处死，浸泡在 75% 酒精内， 3 ～ 5min （ 2 ）无菌取脾脏， Hanks 液洗一次，脾脏剪碎，培养 液洗 一次，过不锈钢筛网，转移至 10mL 离心管 （ 3 ） 800g 离心 10 分钟，取沉淀细胞用 Hanks 液洗 2 次 （每次加入 5mL 溶液，轻轻混匀 800g 离心 10 分钟） （ 4 ）细胞计数，待用。 （ 5 ）取对数生长骨髓瘤细胞， 800g 离心 10 分钟，取沉 淀细胞用 Hanks 液 洗 2 次（每次加入 5mL Hanks 液，轻轻混 匀 800g 离心 10 分钟） （ 6 ）细胞计数，待用。 （ 7 ）将骨髓瘤细胞 (10 5-6 ) 与脾细胞