试验四-鱼类细胞培养基础知识.ppt

实验四 动物细胞培养基的配置和 原代培养 一 实验项目简介 ? 1 、实验学时 6 学时 ? 2 实验过程： ? A 动物细胞培养液的配置 ? B 采用组织培养法培养鱼类细胞 二、实验原理 ? 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的 细胞、组织或器官，经体外培养后，直到 第一次传代为止。这种培养，首先用无菌 操作的方法，从动物体内取出所需的组织 ( 或器官 ) ，经消化，分散为单个游离的细胞 ，在人工培养下，使其不断的地生长及繁 殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十 分严谨的实验技术。 鱼类细胞组培的一些方法： ? ? （ 1 ）组织块固定法 ? 当组织量较少时可采用此法。它是将组织剪成约一立方毫米的小块 , 按一 定比例将组织块贴在瓶壁上 , 至少三十分钟以上 , 然后轻轻加人营养液置温箱培养 。 ? （ 2 ）机械分散法 ? 此法适用于细胞间连接较松散的组织 , 如胚胎组织及幼鱼全鱼。将组织剪 成约一立方毫米耐的小块 , 放入底部有一铜网的注射器内 , 用手的压力将组织挤出 网孔 , 最后将分散的组织吹打后加人营养液分装培养。 ? （ 3 ）络合剂分散法 ? 目前使用的络合剂主要是乙二胺四乙酸 , 它能与细胞间钙离子、镁离子结