磁微粒免疫技术.docVIP

磁微粒化学发光免疫分析技术 化学发光免疫分析技术概述 化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay,CLIA）兴起于上世纪70年代中期，发展至今己经成为一种成熟先进的超微戢活 性物质检测技术，应用范用十分广泛。该技术近10年发展迅猛，是目前推广应用最快的免疫分析方法，也是目前最先进的标记免疫测 定技术，灵嫩度和精确度比酶免法、荧光法高儿个数最级。 二、化学发光免疫分析技术原理 在化学发光免疫分析屮包含两个部分，即免疫反应技术和化学发光技术。其基本原理是免疫反应中的爾作用于发光底物，使之发 生化学反应并释放出大最的能最，产生激发态的屮间体。这种激发态屮间体冋到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测最 仪器即可测最出光戢子产额，该光就子产额与样品屮的待测物质的最成正比，山此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含昴:。化 学发光免疫分析技术常采用双抗体夹心法、竞争法及间接法等反应模式，如图1?3所示。 标本（含抗原） 标本（含抗原） 固相抗体 图1 ?双抗体夹心法 待测管△△△△△△ 待测管 △△△△△△ 标本（含抗原） 图2.竟争法标本（含抗体〉酶标抗体固相抗原图3 图2.竟争法 标本（含抗体〉 酶标抗体 固相抗原 图3.间接法 三、磁微粒在免疫学检测中的应用 磁微粒是指磁性纳米粒子与无机或有机分子结合形成的可均匀分散于一定基液中具有高度稳定性的胶态复合材料。山于磁微粒具 有磁响应性，成木低、能耗少，无污染，粒径小溶解度高、分散性好11磁性强等特点,人们在磁微粒表面或通过磁微粒表面的功能基团 （如氨基、竣基、筑基及坏氧乙烷等）将酶、抗体、寡核昔酸等生物活性物质进行固定，可进一步用于酚的固定化、靶向药物载体、细 胞分选、免疫检测、蛋口与核酸的分离纯化及杂交检测等领域。 传统的免疫学检测多以酚标板为固相载体，盘浮性磁微粒作为载体具有较高的比表面积，能够更为充分地与样品反应，加之外加磁 场的灵活应用，较之酚标板载体具有更高的灵做度、更快的检测速度和更好的乖复性等优点，H前己被广泛应用于生物及页学检测等领 域。 四、磁微粒化学发光免疫分析技术介绍 磁微粒化学发光免疫分析技术综合了磁微粒载体技术和化学发光免疫检测技术，使测最结果更准确，更稳定。 ?磁微粒化学发光-双抗体夹心法： 待测抗原同荧光索标记的抗体及酶标抗体结合形成“三明治结构的复合物。随后加入连有抗荧光索抗体的磁微粒，通过抗荧光素抗 体与荧光索的特异性结合使抗原抗体复合物连接在磁微粒上，在外加磁场中直接沉淀，将免疫反应形成的复合物与未结合的其它物质分 离。去上清后清洗沉淀的复合物，加入輛促化学发光底物。底物在酹作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态屮间体，当激发态中间体 回到基态时便发出光子，形成发光反应，通过光量子阅读系统记录光子能量，并通过计算机处理系统将光能最强度在标准1111线上转换为 待测抗原的浓度，并报告结果。 ?磁微粒化学发光-竞争法： 将待测抗原、用过量包被磁微粒的抗体和定量的标记抗原同时加入反应杯温育，-其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗 体结合形成复合物；二是待测抗原与抗体结合形成复合物。如待测标木中含有待测抗原，则与标记抗原以同样的机会与磁微粒包被的抗 体结合，竞争性地占去了标记抗原与磁微粒包被的抗体结合的机会，使标记抗原与磁微粒包被的抗体的结合最减少。山于磁微粒包被的 抗体是过量的，足以与待测抗原结合。磁微粒在外加磁场中直接沉淀，将免疫反应形成的复合物与未结合的其它物质分离。去上清后清 洗沉淀的复合物，加入酚促化学发光底物。底物在酹作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体冋到基态时便发 出光子，形成发光反应，通过光最子阅读系统记录光子能量，并通过计算机处理系统将光能最强度在标准Illi线上转换为待测抗原的浓度, 并报告结果。 ?磁微粒化学发光一间接法: 待测抗体耳荧光索标记的抗原结合，随后加入包被着抗荧光索抗体的磁微粒,通过抗荧光索抗体与荧光素的特异性结合使抗原抗体 复合物连接在磁微粒上,在外加磁场中直接沉淀,去上清后清洗沉淀的复合物，加入酶标抗体,形成磁微粒一抗原一抗体一酶标二抗夹 心免疫复合物。再次清洗后，加入輛促化学发光底物。底物在酚作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态屮间体，当激发态屮间体回到 基态时便发出光子，形成发光反应,通过光量子阅读系统记录光子能量，并通过计算机处理系统将光能量强度在标准1111线上转换为待测 抗体的浓度，并报告结果。 aw A 待测抗原 酶标抗体荧光素标记的抗体 含有抗荧光素抗体的磁徽粒 图4.磁微粒化学发光免疫分析示意图（双抗体夹心法） 磁微粒化学发光免疫分析法综合采用JH前国际上的两大丄流免疫分析尖端技术一悬浮磁微粒栽体技术、化学发光检测技术，使系