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8/16/2019 第十二章 色谱分析法 一、高效液相色谱法 的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法 的主要分离类型 第 1 节 高效液相色谱法 8/16/2019 液相色谱仪（ 1 ） 8/16/2019 液相色谱仪（ 2 ） 8/16/2019 液相色谱仪（ 3 ） 8/16/2019 液相色谱仪（ 4 ） 8/16/2019 一、高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 8/16/2019 二、流程及主要部件 1. 流程 8/16/2019 2. 主要部件 (1) 高压输液泵 ? 主要部件之一，压力： 150 ～ 350 × 10 5 Pa 。 ? 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ 10 μm ），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 ? 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 8/16/2019 (2) 梯度淋洗装置 外梯度 : 利用两台高压输液泵， 将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。 内梯度 : 一台高压泵 , 通过比例 调节阀 , 将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。 8/16/2019 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： 8/16/2019 (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径 1 ～ 6 mm ，柱长 5 ～ 40 cm 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 8/16/2019 (5) 高效液相色谱检测器 紫外光度检测器（ UV ）：最小检测量 10 -9 g· mL -1 ，对流 量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。 最常用的检测器。 8/16/2019 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器： 1024 个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 8/16/2019 三、影响分离的因素 在高效液相色谱中 , 速率方程中的分子扩散项 B/U 较小， 可以忽略不计，而只有两项，即： H = A + C u 故液相色谱 H-u 曲线与气相色谱的形状不同，如图所示： 影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。 8/16/2019 1. 影响分离的因素 —— 流速 流速大于 0.5 cm/s 时 , H ～ u 曲线是一段斜率不大的直 线。降低流速，柱效提高不是 很大。但在实际操作中，流量 仍是一个调整分离度和出峰时 间的重要可选择参数。 8/16/2019 2. 固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其 选用原则与气相色谱一样。 选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效， 但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常 高的工作，一般很少自行制备。 选择短柱、细内径提高分析速度； 研制高效柱填料是一活跃领域。 8/16/2019 3. 流动相及流动相的极性 （ 1 ）可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱 中显得特别重要。 液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱 剂。 （ 2 ）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。 （ 3 ）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液 液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上 的出峰顺序相反。