米诺环素调控小胶质细胞治疗急性放射性脑损伤的实验性研究.docVIP

米诺环素调控小胶质细胞治疗急性放 射性脑损伤的实验性研究 专业：神经外科学 硕士研究生：王一平 导师：蔡望青副主任医师 中文摘要 研究背景： 放射性脑损伤常见于原发或继发的头颈良恶性病变放射治疗后，也见于丁业 生产中放射损伤。原发的头颈肿瘤中，鼻咽癌是我国尤其华南地区高发肿瘤，占 人口的3 0 / 1 o万.5 0 / t o万，发病率居世界Z首。放疗作为头颈部肿瘤尤其是鼻咽 癌的主要治疗手段，对肿瘤周刖脑组织也造成不同程度的损伤。据统计，放疗后 脑纽?织坏死的发生率可高达2 8 . 5 %,放疗五年后放射性脑病发生率达5 0 % [ 1 1。 目前，国内外研究证实：一些中枢神经系统慢性免疫性疾病（MS, AS等） 以及缺血性疾病，其疾病的发生和发展，都和小胶质细胞肓着很密切的关系。通 过对小胶质细胞的调节或抑制，都可以明显改善疾病的症状或抑制其进程【2—101。 而放射性脑病在临.床症状、影像学表现和病理改变上，都与这一些慢性免疫性疾 病有看很明显的相似性和一致性。小胶质细胞是中枢神经系统中原发性免疫效应 细胞，发挥了启动炎症反应的巫要作用【11，12】。由此推断，小胶质细胞在放射性脑 损伤中，很有可能也起到一个至关巫要的作用。从小胶质细胞出发来探索研究放 射性脑病，可能有助于揭开放射性脑病的发病机制。米诺环泰是小胶质细胞的抑 制剂Z-,在目前的研究中，它的使用较为广泛，效果显著，对抑Nd,胶质细胞 免疫反应疗效也已得到证实【13. 1 4 ] o因此我们推断，通过米诺环索调控小胶质细胞 活性治疗放射性脑损伤，疗效应该会十分明显。 激活的小胶质细胞产生既保护又损伤的双巫作用： 放射后小胶质细胞激活是脑损伤中的巫要环节，在脑损伤的发牛和发展中发 挥关键作用。放射损伤后，脑局部受损细胞释放大量的炎性介质和炎症因子，这 -些物质既是组织损伤的?危险信号[也可作用于小胶质细胞并通过相应的信 号通路使其激活，月?射线本身亦可岂接激活小胶质细胞，活化的小胶质细胞继而 发生形态和功能上的一系列变化： 形态学改变：细胞由“静止”时具有长突起的吩枝‘样转化为短突起及 胞体变圆的邛可米巴样。 旁分泌功能：活化的小胶质细胞表现出强大的旁分泌功能，释放一系列细 胞因子介导卜?游级联反应。现有的研究表明，放射后小胶质细胞激活释放大量促 炎症细胞冈子，包括I L?IB, IL-6, C O X- 2 , TNF—a [Is ?x6]。值得注意的是, 在其他脑 损伤如脑缺血、L P S引发脑损伤、癫痫等动物模型中，活化的小胶质细胞除释放 上述的促炎症因子外，.还可分泌抗炎症因子如1L— 10、TGFB I .胰岛索样生长因 子一I C I G F — 1 ),以及神经营养因子如BDNF. GDNF L 1 7?1 91。抗炎症细胞因子及 神经 晉养因子则主要参与神经保护作用。 趋化与吞噬作用：激活的小胶质细胞可通过向受损局部移行，吞噬损伤细胞 碎屑，淸除坏死脑组织，抵御外来抗原的侵袭起防御作用，同时可促进局部神经 的修复。 由此可见，活化的小胶质细胞在脑损伤中起到既保护又损伤的双巫作用，犹 如“双刃剑 一方血，小胶质细胞活化后通过旁分泌帑放的促炎症因子介导神 经元及其他胶质细胞损伤，同时通过促炎症因子作用于小胶质细胞口身形成正反 馈环路加巫其损伤；另一方面，活化的小胶质细胞具有向损伤细胞的趋化与吞噬 作用及分泌TGFB I介导其神经修复的一面。针对小胶质细胞的这种双巫特性，我 们设想，放射后，如能调控小胶质细胞的活性及其功能，仅保留小胶质细胞促神 经修复的作用，而有效控制其损伤作用，在治疗中采取“趋利避害”的策略，将 可突破放射性脑损伤治疗的瓶颈，为放射脑损伤治疗开创全新的局面。而要实现 对小胶质细胞的调控，首先要明确这些功能相应的调控冈索。 研究目的： .阐明小胶质细胞放射活化后分泌损伤性炎症因子的变化，进一步明确放射 性脑损伤的发病机制。 .阐明米诺环索通过作用于小胶质细胞，调控小胶质细胞释放损伤性细胞因 子的机制，为从源头上抑SJ 1 d,胶质细胞的损伤效应提供科学依据，也为治 疗放射性脑病的药物研发提供新的方法和思路。 通过实验性研究，探索米诺环索作用于小胶质细胞的相关机制和路径。达 到治疗放射性脑损伤的最终目的，为放射性脑损伤的临床治疗开辟全新的 途径。 本研究采用的统计学方法：计量资料的描述用均数土标准差（X±s ）表 示，多组资料间的比较采用单因索方差分析。应用s PS S 1 1 . 5统计软件作统计 学处理。检验水准定为尸＜0?0 5有统计学意义。 本研究共分二部分进行论述。 第一部分：离体部分 日的：在离体实验上证实米诺环素对小胶质细胞的抑制作用。 方法： .小胶质细胞于含1 0 %新生牛血清的高糖DMEM培养基中培养，在5 %的CO