(完整版)冻干多肽的溶解的方法.docxVIP

冻干多肽的溶解 多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成。 虽然疏水肽链二级结构的形成更明显，但除了最短的肽链外，该现象发生在几乎所有肽链， 与极性无关。 因此， 溶解多肽的第一个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水 （如果条件允许则用无氧水）。 多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生，多肽应溶解在无菌的蒸馏水中，或者 用 0.45 或 0.2 μm孔径的滤膜过滤除菌。包含 Cys 、 Met 、 Trp 的多肽特别容易氧化，因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体（氮、氦、氩）减压除气得到。 若多肽不溶于纯水，超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意：超声处理会引起溶液发热和多肽降解。 若多肽中包含多个碱性氨基酸，使用 1~10% 的乙酸水溶液；对于疏水性非常强的多肽，则使用 50% 乙酸。 若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用 1~10% 氨溶液或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。 pH 值在层析前必须调整。 若肽要上柱，有机溶剂的量则必须很少，否则将严重影响滞留时间。 若多肽因为含有 Val 、 Leu 、 Met 、 Phe 、 Tyr 、 Ala 等芳烃侧链而高度疏水，或为中性肽时， DMF 或 DMSO 等膜变性剂的使用，有助于多肽的溶解。 高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶。 膜变性剂适于多肽分析液的制备，但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。 c . DMF 是最佳变性剂（最高浓度可达 30% ），滴加至多肽溶解。 d. 反相层析时， DMF 将与洗脱液前峰一起流出，依进样量的多少，峰值可能很高。大多数肽能在大量 DMF 流出后几分钟内流出，若肽链很小，洗脱太早，多肽的量将降低。