(完整版)HepG2细胞培养的条件.docxVIP

1. 复苏温度的选择 : 快速将所冻存细胞 40℃水浴摇床 60 转 / min 慢摇至其溶解， 溶解后马 上转入 37 ℃水浴箱，手工慢摇恒温 2 ～3min 复苏 ,复苏后 800 转 / min 离心 5min, 吸去上清加入 10ml 含 15%胎牛血清 DMEM 培养基 ,混匀后加入细胞培养板 ,每孔 1 ml， 5%CO2温箱 37℃培养 . 2. 复苏培养基的选择 : 用 DMEM 培养基培养的细胞结果在接种密度为 1× 104/cm 2、血清含 量为 15%时，经 6h 培养后细胞开始贴壁， 12h 后大部分细胞贴壁， 且增值速度最快， 4d 后可以按 1:3 的比例传代。 复苏的接种密度 : 最佳接种密度为 1× 104/cm 2. 消化酶以及消化时间的选择 : 先用 pH7.2 的 PBS洗涤三遍后，再用 0.25%的胰蛋白酶溶液消化 0.5 分钟效果比较好 . 培养基中血清浓度的选择 : 10%--20%.最好 .15%就差不多 . 双抗浓度的选择 : 双抗浓度为 0.5%时传代效果较好， 条件易于控制， 且细胞能顺利生长 . 培养基 pH 条件的选择 : pH7.2, 4.5%CO2 时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长 细胞传代条件的选择 : 推荐在汇合度在 95%-10