蛋白质及氨基酸的测定.pptVIP

第九章 蛋白质及氨基酸的测定;第一节 概述; 蛋白质含量测定最常用的方法;思考题;; 蛋白质含量测定最常用的方法;蛋白质分析的重要性;蛋白质的测定方法;氨基酸总量——酸碱滴定法测定。 各种氨基酸的分离与定量——色谱技术。 有多种氨基酸分析仪。;第一节 蛋白质的测定; 凯氏定氮法：常量法、微量法及经改进后的改良凯氏定氮法;一、 凯氏定氮法;1、通过学习觊氏定氮法的原理，我们可知道操作分为哪几个大的步骤？ 2、加入硫酸钾、硫酸铜的作用是什么？;整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定;浓硫酸具有脱水性:使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。硫酸又具有氧化性:将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二氧化硫 二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。 ;蛋白质及氨基酸的测定;观察与思考： 1、样品中加入浓硫酸后，溶液的颜色立即发生什么变化？ 2、瓶颈有什么颜色的有毒烟产生？ 3、如何判断消化的终点？;消化炉;蒸馏与吸收;蛋白质及氨基酸的测定;QSY-Ⅱ型蛋白质测定仪 ;滴定;1用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定 指示剂：混合指示剂（甲基红—溴甲基酚绿） 指示剂 红色 绿色 红色 （酸） （碱） （酸）;计 算;（二）、 微量凯氏定氮法;②??? 蒸馏;③ 滴定：取下接受瓶，以0.01000mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。;采用凯氏定氮法测一样品的粗蛋白含量，根据下列记录的数据计算： 水份含量=8.0%，1 号样品重量=1.015g，2号样品重量=1.025g，用于滴定的标准HCl当量浓度=0.1142N，1号样品所用的HCl溶液的毫升数=22.0mL，2号样品的HCl溶液的毫升数=22.5mL，空白的HCl溶液的毫升数=0.2mL，分别以样品的干基和湿基计算粗蛋白质含量，假定该蛋白质含有17.5%的氮。 ;二、双缩脲法; 蛋白质分子中含有肽键 —CO—NH— 与双缩脲结构相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，可用分光光度计来测其吸光度，确定含量。（560nm） ;???作方法;福林-酚法（双缩脲法的发展）;杜马斯法（燃烧法）;几种蛋白质测定方法比较;氨基酸态氮的测定;氨基酸态氮的测定;一、双指示剂甲醛滴定法;双指示剂：百里酚酞+中性红指示剂; 操作方法 移取含氨基酸约20～30mg的样品溶液2份，分别置于250mL锥形瓶中，各加50mL 蒸馏水，其中1份加入3滴中性红指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为 琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20mL，摇匀，静置1分钟，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别纪录两次所消耗的碱液mL数。;式中 c ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L; V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL; V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL; m——测定用样品溶液相当于样品的质量，g 0.014——氮的毫摩尔质量，g/m mol ;二、电位滴定法;磁力搅拌器;酸度计的使用操作规程 调节开关 用缓冲溶液校正pH计 ;清洗电极 吸干电极上面的水 把电极插入被测溶液中;测定 清洗并擦干电极;酚酞乙醇指示液：1% 硼砂（标准物质）缓冲液：PH9.22 称取3.8克 Na2B4O7 溶解后，定容至1000mL 甲醛：36%-----38% 0.0500mol/L氢氧化钠标准溶液;(4) 试验步骤;式中 ρ------氨基酸态氮质量浓度，g/100mL; c-------氢氧化钠浓度，mol/L； V1-----加入甲醛后耗NaOH的量，mL； V2------空白试验加甲醛后耗NaOH量，mL； V3------测定用样品稀释液的量，mL； M氮----氮的摩尔质量，14.01g/mol； 5-------样品量，mL.