第二章核酸化学.ppt

核酸化学;核酸能告诉你什么？;目的;掌握核酸紫外吸收的特性及热变性的性质，从核酸热变性的基础上理解DNA的复性与分子杂交，掌握DNA的熔解温度、增色效应的概念。 了解核酸的化学反应；各种核酸酶对核酸的水解作用；限制性内切酶的作用特点及该酶的应用。 了解DNA一级结构的测定原理。 了解DNA在生物体内的存在方式及由DNA构成的染色体的结构。 ;研究历史（1）;研究历史（2）;研究历史（3）;核酸是Lock还是Key？;第一节　核酸的种类、分布和含量; 1、rRNA (ribosome RNA )，核糖体RNA，细胞中最主要的RNA，占细???中总RNA80%左右。核糖体是蛋白质合成的场所。 2、tRNA ( transfer RNA)，转移RNA，是细胞中最小的一种RNA分子，占细胞总RNA的15%左右。在蛋白质的生物合成中，tRNA起携带氨基酸的作用。;3、mRNA ( messenger RNA)，信使RNA，占细胞总RNA的5%左右，含量最少，代谢活跃。mRNA在蛋白质的生物合成中起模板作用。它将DNA的遗传信息传递给蛋白质。 　 另外，在细胞质里还存在胞质小RNA(sc RNA). 　上述RNA存在于细胞质，另外在细胞核里面还存在一些RNA，如核不均一RNA（hnRNA）、核内小RNA（snRNA）、核仁小RNA、反义RNA（asRNA）等。 ;RNA的分类;（二）、分布 DNA ??????????RNA 核（%） 98 ???????????10 浆（%） 2 ????????????90 （三）、 含量 ??? ?DNA含量恒定，RNA含量与细胞生长状态有关。 ??;第二节 核酸的组成;核酸和蛋白质元素组成相同么？;一、核酸的元素组成 ;二、核酸的基本结构组成;;(一）碱基 核苷酸中的碱基均为含氮杂环化合物，它们分别属于嘌呤衍生物和嘧啶衍生物。 核苷酸中的嘌呤碱(purine)主要是鸟嘌呤(guanine,G)和腺嘌呤(adenine,A)， 核苷酸中嘧啶碱(pyrimidine)主要是胞嘧啶(cytosine,C)、尿嘧啶(uracil,U)和胸腺嘧啶(thymine,T)。 ;核苷酸的结构式;脱氧核苷酸的结构;;;（二）戊糖;（三）核苷 ;（四）核苷酸衍生物;核酸的简写式;第三节 DNA的结构 ;一、DNA的一级结构 ;二、DNA的二级结构;;DNA双螺旋的不同类型;(1).回文序列 所谓回文序列就是指DNA某一片段旋转180.后,顺序不变的序列,回文序列中的单链可形成发夹结构.双链可形成十字架结构。这种发夹结构或十字架结构在大肠杆菌细胞DNA中已有发现.;(2).镜象结构 所谓镜象结构就是指DNA某一片段在一条链上出现颠倒重复的序列.;四链DNA：可能存在于真核细胞染色体的端粒中。 ;三、DNA的三级结构 ;核小体结构如图所示:;其组装的层次如下图所示：;第四节 DNA和基因组;人类基因组计划;五、分子杂交;六、DNA序列分析的程序;有没有可能出错？在哪出错？出错的后果？;第五节 RNA的结构和功能 ;?一、RNA的分子结构;（二） RNA二级结构 ： 单链RNA自行盘绕形成局部双螺旋的多“茎”多“环”结构，螺旋部分称为“茎”或“臂”非螺旋部分称为“环”，在螺旋区，A与U配对，G与C配对。 ;;二、tRNA ;?tRNA的二级结构： 三叶草形状 RNA三叶草型的二级结构可分为：氨基酸接受区、反密码区、二氢尿嘧啶区、TΨC区和可变区。除氨基酸接受区外，其余每个区都含有一个突环和一个臂。如图所示：; tRNA的?三级结构： 倒“L”形，所有的tRNA折叠后形成大小相似及三 维构象相似的三级结构，这有利于携带的氨基酸的tRNA进入核糖体的特定部位。 如图所示：;三、rRNA ;四、mRNA ;五、核酸的功能 ;第六节 核酸的性质 ;一、理化性质;二、核酸的紫外吸收 ;三、核酸的变性 ;四、核酸的复性;五、分子杂交;六、DNA序列分析的程序;第七节 核酸的分离纯化;一、 分离核酸的一般原则 因为遗传信息全部贮存在核酸的一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基础。 （一）核酸的分离和纯化时应遵循两个原则： 1、 保证核酸一级结构的完整性； 2、 排除其它分子的污染。 ;（二）、核酸的纯度要求 　1、 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； 2、 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度； 　3、排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除RNA，反之亦然。;（三）、核酸分离纯化的注意事项 1、 简化操作步骤，缩短提取过