对人体DNA进行重组的工具.pptVIP

基因工程 专题1 又叫做： DNA重组技术 一、DNA重组技术的基本工具 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花产生伴胞晶体 转基因棉花有抗虫特性 一、DNA重组技术的基本工具 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ①来源： 主要从原核生物中分离纯化出来。 ②种类： 已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。 ③作用： 1.能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 2.使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 磷酸二酯键： 磷酸二酯键： EcoRI限制酶的切割： 中轴线 黏性末端 黏性末端 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 C C C G G G G G G C C C 中轴线 SmaI限制酶的切割： C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 (二)“分子缝合针”——DNA连接酶 具有特异性。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子， ④作用特点： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 ⑤限制酶的识别序列： （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 寻根问底 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 ①作用: ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 有切割位点(供外源DNA片段(基因)插入) 能自我复制—— 有遗传标记基因(供重组DNA的鉴定/选择) 载体DNA必需是安全的(不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去) 载体DNA分子大小应适合(以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作) (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车”的必要条件： 将外源基因送入受体细胞。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” ①载体的作用： 质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒等 ②载体的种类： 质粒： 裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 质粒： 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 1）不属于质粒被选为基因载体的理由是（ ） A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 2）有关基因工程的叙述中，正确的是（ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的载体 C、载体必