cx43及其半通道与缺氧缺血性乳鼠脑损伤的相关性研究.docxVIP

Cx43 及其半通道与缺氧缺血性乳鼠脑损伤的相关性研究 1 研究背景新生儿缺氧缺血性脑损伤 (hypoxic ischemia brain injury,HIBI) 仍然是婴幼儿急性死亡率和慢性发病率的重要原因 , 据估计缺氧缺血脑损伤的发生在发达国家大约是每 1000名出生的足月新生儿中有大约 2-4 名, 发展中国家是 20-30 倍, 甚至更高。此外 25%的会出现严重的 , 永久性神经心理后遗症 , 包括如智力落后、视觉运动障碍、视觉感觉障碍、多动、脑瘫、癫痫等。尽管新生儿医疗保健不断发展 ,HIBI 病理生理机制的研究在不断增加 , 但缺氧缺血仍持续导致显著的长期神经功能障碍或死亡。 出生窒息的新生儿每年估计约 1 百万或占全世界新生儿死亡的 23%。 HIBI 是一个渐进的过程 , 大量的证据显示不成熟和成熟脑组织对脑损伤的病理和后果存在明显不同。神经元之间的连接以突触为主 , 而胶质细胞之间多通过缝隙连接 (gapjunction,GJ) 进行信息的传递 , 其中星型胶质细胞通过 GJ高度联系的 , 允许细胞外 K+、H+、谷氨酸和其他物质的空间缓冲。星型胶质细胞表达的连接蛋白 43(connexin,Cx43) 及其半通道 (hemichannel,HCl) 在神经系统疾病中得到越来越多的探索 , 为我们研究 HIBI 的发病机制和治疗带来新的视野方向。与神经元相比 , 星型胶质细胞组成了脑内细胞的种群 , 能够表达最高数量的缝隙连接蛋白 , 称为连接蛋白 (connexin,CX) 。 由连接蛋白组成的六聚体结构 , 称为连接子。由同种连接蛋白组成的连接子 为同聚体连接子 , 不同种连接子组成异聚体连接子。相邻的细胞膜对应面上的一 对连接子组成缝隙连接通道。同聚体连接子构成同型缝隙连接 , 异聚体连接子参 与构成异型缝隙连接。 连接蛋白是跨膜蛋白 , 形成细胞间两种不同的通讯途径。一种途径涉及缝隙 连接通道 (gap junction channel,GJC) 定位于相邻细胞之间 , 允许直接的细胞与 细胞间离子和小分子的传递。另一种途径是通过半通道定位于非对向的细胞面 , 允许细胞内和细胞外区域的交换 , 包括自分泌或旁分泌信号分子 ( 例如 ,ATP,NAD1, 和谷氨酸 ) 到细胞外介质。目前在哺乳动物中已发现 CX家族有至少 21 个成员 , 根据 CX分子量的不同而命名 ; 根据基因序列同源性程度和胞浆内环状结构域长 度的不同可分为不同的亚类 , 即α、 β、及 γ类。 Cx43属于 α -CX亚族 , 分子质量 43kD,Cx43在脑组织中表达最强 , 星形胶质细 胞、活化的小胶质细胞、 处于发育阶段的神经元、 血管平滑肌和血管内皮细胞上都有分布。多年来一直认为半通道是缝隙连接的一半 , 不能够独立发挥作用。近些年通过几种试验方法证实半通道能够独立存在。 冷冻断裂复制非洲爪蟾蜍卵母细胞胞浆表达 Cx50, 展示一种新的膜内粒子群 ( 直径约 9nm)与全细胞电流有关。 使用抗 Cx26抗体与 Cx26 C端的区域发生反应 , 免疫荧光发现 Cx26定位于一种硬骨鱼水平细胞树突尖端 , 此处缝隙连接是缺乏的 , 暗示 Cx26 可能形成半通道。应用促炎症试剂处理人类多形核细胞 , 不是静止细胞 , 通过免疫荧光使用抗体直 接作用于 Cx43 细胞外环 1, 发现了 Cx43 半通道的存在。通过生物素化细胞表面蛋白的蛋白印迹发现骨细胞 MLO-Y4的表面存在一定水平 Cx43。Cx43 半通道的一部分在休息状态时能开放 , 有一定的生理作用 , 当在病理环境下变得更加活跃 , 导致胶质递质 (ATP, 谷氨酸 ) 的释放 ,Ca2+、葡萄糖的进入 , 离子的失衡 , 细胞容积的超载 , 甚至在一些情况下 , 出现细胞死亡。 连接蛋白调节通道功能 , 是动态性和代谢相互作用所必需的 , 这种相互作用是星型胶质细胞建立与自身和他们界面上神经元与脉管系统之间的作用。 事实上 , 在转基因动物中 , 有 2 个主要的星型胶质细胞性连接蛋白 , 如 Cx43和 Cx30被删除 , 展现出钾清除 , 突触传递和可塑性受损 , 一种髓鞘形成障碍性表型及血脑屏障完 整性丢失。目前为止 , 使用单 Cx 基因敲除鼠能提供关键资料证实在神经元迁移中 Cx43的作用。在中风 , 以前的研究提到星型胶质细胞一个可能的作用是扩大损伤。 事实上 , 他们是主要防御兴奋性细胞毒性 , 通过积极清除谷氨酸。然而 , 能量 耗竭能够逆转转运 , 随后导致谷氨酸转运体 GLT-1 的下调 , 加剧兴奋性细胞毒性。 在组织的应激下 , 星型胶质细胞能够通过 GJC播散凋亡信号和 HCl 信号。在代谢 抑制剂诱导的应激下 ,