菊花组织培养.docVIP

摘要：菊花在花卉生产屮占有重要地位，而花瓣组织培养，可以缩短植物生长周期， 还可使再生植株特性的变异更加丰富多彩，在菊花育种研究屮涉及的细胞杂交和基因转移等 生物技术的应用中具有重要意义山。本实验是利用黄色菊花花瓣为外植体。在诱导培养屮， 控制6?BA的浓度1.0mg/l , NAA的浓度0.3mg/l,将己分化的细胞脱去分化状态，使其恢复 到未分化的分生状态，然后进行再分化，最终形成完整的植株。 关键词：菊花激素诱导愈伤组织分化 1?前言 1实验背景 植物纟FI织培养（tissue culture）是二十世纪初兴起的?项高新生物技术，至今E1经有 ?-百多年的历史。和植物组织培养的勿史相比，屮国的在这方面的研究起步算是比较早的, 在二十世纪四十年代在这方而就有所研究，但是人范围的发展起来还是始于二十世纪七十年 代的花药培养。 利用组织培养可以快速繁殖保存某些稀有植物或有较人经济价值的植物，挽救濒于灭 绝的动植物，还可以为细胞杂交和基因转移等生物技术在育种研究屮的应用提供帮助⑴。随 着人们生活质量的提高，人们其至利用组织培养的花卉等发展装饰产业，作为一项实验技术, 植物组织培养有着十分广阔的前景，如今已成为了生物领域里而十分活跃的技术卫乜。 2实验目的 学习利用外植体诱导形成愈伤组织和愈伤组织分化培养的方法；了解植物组织培养的操 作程序；初步掌握植物组织培养的关键技术（培养基配宜、灭菌、无菌操作、培养筹）。 3实验原理 植物组织培养是指植物的器官、组织或细胞，在人工控制的条件下，接种在人工合成 的培养基上，能发育成完整的植株。实现实验成功的基础理论是植物细胞的全能性，即植物 的任何一个体细胞，具有完整的细胞核，具有整套的遗传信息，在一?定的条件下可以发育成 完整植株。 全能性的实现是通过脱分化和再分化过程來实现的： 脱分化 再分化 器官分化 分化的细胞 分生状态 再生植株 （外植体） 体细胞胚 川于培养的器官、纽织、细胞通称外植体，它们的细胞是高度分化的，培养的第一步 就是诱导这些已经分化的细胞脱去分化状态，使其恢复到未分化的分生状态；第二步是要使 这些恢复到分生状态的细胞重新分化形成植株。 一般而言，高比例的6?BA/NAA有利于芽的形成，低比例时有利于根的形成。光照时 离体培养中比较复杂的调节因子，光照时间、强度以及光质对器官分化均有影响⑶。 材料及方法 1材料 I. 1外植体 黄色菊花，是菊科菊属的多年生宿根草本植物。菊花的品种非常繁多，叶、花型、瓣型 变化很人，是植物组织培养的理想材料。 2. 1. 2试剂 蒸谓水，95%的乙醇，次氯酸钠，储备液I、II、IIL IV, 激索：细胞分裂索6?BA （6■节基腺喋吟），生长索NAA （ Q ■荼乙酸）， 其他：療糖、琼脂粉等 2. 1. 3器材 手捉式灭菌锅，无菌操作台，培养箱，冰箱，天平，平底试管，培养皿，锥形瓶，量筒, 烧杯、ph试纸，酒精灯，滤纸，玻璃棒，橡胶塞，小烧杯，玻璃棒，剪刀，铁子，解剖刀, 记号笔，标签纸，滤纸，报纸，棉塞，棉线筹 2?1. 4配制溶液的配制 培养基 储备液 NH4N03 1650 33000 KN03 1900 I 38000 CaC12. 2H20 440 20 X 8800 MgS04. 7H20 370 7400 KII2P04 170 3400 KI 0. 83 166 H3BO3 6.2 1240 MnS04. 4H20 22.3 II 4460 ZnS04. 7H20 8.6 200 X 1720  Na2Mo04. 2H20 0. 25 50 CuSOd. 5H20 0. 025 5 CoC12..6H20 0. 025 5 FeS04. 7H20 27.8 III 5560 Na. EDTA. 2H20 37.3 200 X 7460 肌醇 100 20000 烟酸 0. 5 IV 100 烟酸毗哆醇 0. 5 200 X 100 盐酸硫胺索 0. 1 20 甘氨酸 2 400 激索、试剂 配方 0. 01g/ml NAA 将0. 5gNAA溶解在50ml, 95%的乙醇中，用玻璃棒搅拌，转入到50ml 容量瓶屮，定容，贴上标签备用。 0. 01g/ml 6-BA 0.5g6-BA+50ml lmol/1 NaOH 2%次氯酸钠 4. OgNaC10+200ml 蒸帼水 70%乙醇 147ml 95%的乙醇+200ml蒸饰水 2?2方法 2. 2. 1外植体的制备及灭菌 2. 2. 1. 1 MS培养基的配制 称取称取琼脂0.7g,蔗糖3. Og于250ml的烧杯屮，向其屮加入75ml的水溶解，再向其屮 加入贮备液I 5 ml, II0. 5 ml, III 0.5 ml, IV 0.5 ml,加水混匀定容到lOOm