羊亚洲i型口蹄疫抗体(fmd-i)酶联免疫分析试剂盒使用.pdfVIP

羊亚洲 I 型口蹄疫抗体（ FMD-I ）酶联免疫分析试剂盒使用 说明书 本试剂盒仅供研究使用。 96T 使用目的： 本试剂盒用于测定羊血清、 血浆及相关液体样本中亚洲 I 型口蹄疫抗体 （FMD-I ）表达。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中羊亚洲 I 型口蹄疫抗体（ FMD-I ）表达。用纯化的抗 原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中亚洲 I 型口蹄疫抗体（ FMD-I ）相结合，经洗涤 除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原 -抗体 -酶标抗原复合 物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作 用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），与 CUTOFF 值相 比较，从而判定标本中羊亚洲 I 型口蹄疫抗体（ FMD-I ）的存在与否。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×1 瓶 7 终止液 6ml ×1 瓶 2 酶标试剂 6ml ×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml ×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔× 8 条 9 阴性对照 0.5ml ×1 瓶 4 样品稀释液 6ml ×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml ×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。 操作步骤 1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50 μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40 μl，然后再加待测样品 10 μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μl ，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μl ，再加入显色剂 B50 μl ，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色 15 分钟 . 10. 终止：每孔加终止液 50 μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零