花色色素分析实习.docVIP

实习“花色” 第八学期园艺学 对于花色色谱來说有三类结构完全不同的物质：类黄酮、类胡萝I、索和甜菜碱。其屮类黄酮 特别是花青素是最重要的花色索。关于类黄酮生化和遗传学方面的细节在附件一屮集屮列 举。 萃取和鉴定花青素昔、花青素和其他类黄酮 萃取和鉴定花青素昔、花青素和其他类黄酮 花青索和其他类黄酮可以利）（］1%的甲醇盐酸（l%MeOH/HCl=97ml Methanol + 3 ml 36% HCI）从花瓣或者其他植物部位萃取出来。为了防止花青素降解，萃取最好在喑处和4。C 条件下进行。盐酸能够使花青素稳定。根据需要和可支配时间不同可以选择上动和被动萃取 方法。 （1） 主动（快速）萃収： 将部分含有花青索的植物组织和少量1%的MeOH/HCl 一块在离心管里面弄碎（川小 铲子）或者在研钵里而捣碎，组织残渣可以选择离心去掉。 优点：■快速萃取 ■得到浓缩的花青索萃取物，可以立即用來进行分光光度计检测或者色谱检测 缺点：■对于定量分析來说不是十分精确，或许不是所有的色素能够被同时萃収出來 ?对于大量样本的试验来说，消耗大量的操作时间 （2） 被动（慢速）萃取： 将含有花青索的组织放在密封良好的器皿里面（离心管、烧瓶等）用1%的MeOH/HCl 淹没，然后放在4度暗处（冰箱里面）儿天其至儿周萃取 优点：■大量样本时减少萃取操作时间 ■可以进行定性分析，例如1克花放在20-40ml 1%的MeOH/HCl里而萃取人约40个 小时，随后可以用分光光度计来测量其含量 缺点：■萃取吋间长 ■萃取物需要--般情况下需要在旋转蒸发仪里面浓缩后才能用來进行色谱分析。 被动萃取同样对于其他类黄酮（例如黄酮醇、黄酮、黄烷酮、二轻黄酮醇）的提収具有优势。 尽管他们的萃取液不是1%的MeOH/HCl而是乙酸乙酯（EthylacegEfoAc）.这样的话在其 他类黄酮被萃取出的时候，花青素就能保留在水相里而。 不管哪种萃取方法，萃取物都可以在4度暗处超过一个月其至一年保存。被萃取的植 物组织应该在保存前去掉（离心、过滤）。 实习内容： -用1%的MeOH/HCl主动和被动萃取一种植物两个品种（系）不同花色的花 用MeOH （不含盐酸）被动萃取这些殆系 用EtoAc （CH3C00C2H5）被动萃取这些品系 II. 分光光度计检测 类黄酮在600nm和200mn区域附近具有两个吸收峰的特征谱，一个在可见光区域（峰 I）,另一个在紫外区域（峰II）。 在用1%的MeOH/HCl萃取的Anthocyanin及Anthocyanidin峰I的吸收值为 天竺葵索 Pelargonidin （Pg）: 520 nm, Pelargonidin-Glycoside: 505-512 nm 矢车菊素 Cyanidin (Cy):535 nm, Cyanidin-Glycoside: 523-528 nm E燕草素 Delphinidin (Dp): 545 nm, Delphinidin-Glycoside: 535-538 nm 峰II-?般情况下吸收高峰位于275 nm。 其他类黄酮的吸收光谱人多数是在纯甲醇里面测量，其屮列举下述吸收值： 对于黄酮醇Flavonol (例如山蔡酚Kaempferol (Km),榭皮素Quecetin (Qu),杨梅素 Myricetin(My))和他们的糖昔(Glycoside)来说，峰I位于350 nm和380之间，峰II位于 266nm 和 275 nm 之间。 对于黄酮Flavone (例如芹菜素Apigenin(Ap),木犀草素Lueolin(Lu))以及他们的糖苛來 说，峰I位于330 nm和350之间,峰II位于270nm附近。 二氢黄酮醇 Dihydroflavonol(例 如 Dihydrokaempferol(DHK),Dihydroquercetin(DHQ), Dihydromyricetin(DHM))R在紫外区域290nm处有一个吸收峰。 黄烷酮(例如柚皮素Naringenin(Nar),圣草酚Eriodictyol(Eri))也只在288 nm含有一个 峰。 吸收光谱需要在紫外可见分光光度计测量。测量通过在600 nm和200 nm之间对比类 黄酮萃取液和溶液的光吸收差别进行(Extinktion)o测量必须用石英比色杯，因为觀?料比色 杯不适于测量用，因为犁料本身在紫外区域也有吸收。 作业：(1)测量特定类黄酮的吸收光谱。天竺葵索、飞燕草索、矢车菊索以及他们的 糖甘及山蔡酚、刪皮索、芹菜索、木犀草索的原液(1 mg/ml l%MeOH/HCl)作测量用。 20 M原液稀?释到1480M 1% MeOH/HCl后放置到1.5 ml冇英比色杯以稀释液做对照进 行测量。 (2)测量花瓣的萃取物的吸收光谱，萃