病毒的遗传分析.pptxVIP

第七章 病毒的遗传分析;第一节、病 毒 概 述;烟草花叶病毒　腺病毒　　　　T4 噬菌体　　　艾滋病病毒 RNA　　 　　DNA 　　　　　DAN　　　　　　RNA;2、病毒的类型;病毒类别;病毒 (virus) 类别; 在遗传学研究中使用最为广泛的是噬菌体 三大特点：繁殖周期短、易得大群体、基因组小。 ;;PB2和PA来自于禽的H5N1;SARS病毒——一种全新的冠状病毒;禽流感病毒;二、噬菌体的繁殖;2、温和噬菌体的侵染周期;λ噬菌体的生活周期;P1噬菌体的生活周期;T7 噬菌体;三、噬菌体的突变型;常见的条件致死突变型有两种： ①温度敏感突变：热敏突变→限制条件≥40℃ 冷敏突变→较低温度下致死 ②抑制因子敏感型突变sus:噬菌体发生了无义突变 许可条件→宿主菌带有抑制因子（su+） 限制条件→宿主菌没有抑制因子（su-） ;2、噬菌斑形态和宿主范围的突变型 ①噬菌斑形态突变型 ②宿主范围的突变型 宿主范围的突变型其本质也是条件致死突变型之一。 T4噬菌体rⅡ突变侵染大肠杆菌B能产生大的噬菌斑，侵染大肠杆菌K是致死的，侵染S产生小的噬菌斑。; 抑制因子敏感型突变sus实质就是无义突变，即编码氨基酸的正常密码子突变成了终止密码: →UAA:赭石突变、→UAG:琥珀突变、→UGA:乳白突变。 宿主菌的无义抑制基因su+也是一种突变基因，即携带某个氨基酸的tRNA的反密码子突变成了与一个终止密码互补的特殊反密码子，与噬菌体的无义突变能互补配对，合成正常长度的蛋白质。;在不同专一抑制基因宿主菌中sus突变噬菌体的表现; 无义抑制当然也会使其它基因编码的蛋白质变得更长，但正常（野生型）蛋白质仍占多数。 ;第二节：噬菌体染色体作图; h-r+ × h+r- ↓品系1 h-r+ h+r- h-r- h+r+ ;不同速溶菌的突变型在表现型上不同，可分别写成ra-、rb-、rc-等，用rx–h+×rx+h-　获得试验结果列于下表： 杂交组合　　　　各基因型（%）　　 重组值 　　　　　　r-h+　r+h-　 r+h+　r-h- Ra-h+×ra+h- 34.0　42.0 12.0　12.0 24.0/100=24% Rb-h+×rb+h- 32.0　56.0 5.9　6.4 12.3/100.3=12.3% Rc-h+×rc+h- 39.0　59.0 0.7 0.9　　　1.6/99.6=1.6% ;四种可能的基因排列连锁图:;二、噬菌体突变型的三点测验;s系: 小噬菌斑; mi系: 微小噬菌斑; c系: 完全清亮; 凯泽利用l噬菌体的三突变与野生型进行杂交作图 S co1 mi × + + +;λ噬菌体的基因组遗传图;2、噬菌体突变基因的重组特点;被外壳蛋白包装起来为止。一个裂解前的宿主菌单细胞内，就形成了包含所有可能基因型的噬菌体“交配库”（mating pool）。 3)、不同基因型噬菌体之间常常发生多次交换 4)、提前进行人工裂解可降低基因重组频率 用1.0 mM KCl处理可使 E.coli 细胞裂解 ;第三节：?噬菌体基因组与原噬菌体;?噬菌体的线状ds-DNA进入宿主菌细胞后,两端的cos末端互补配对,断口由DNA连接酶接上,形成环状的ds-DNA。这时12bp的cos末端序列互补区叫cos位点。 此后，转录早期表达蛋白，有两个发展方向： 1、溶源性反应；2、大量复制→裂解宿主菌;二、?噬菌体的生活周期;2、?噬菌体生活周期与基因的有序表达; 4、后期转录→cro蛋白与OL和OR结合，阻止RNA聚合酶与PL和PR结合，转录终止。此时控制蛋白Ｑ对P`R起激活作用，导致后期基因转录 5、裂解→后期基因转录产生大量Ｒ和Ｓ编码产物，细菌细胞裂解，噬菌体颗粒释放 ;三、?噬菌体的溶源性反应; attP 的序列结构特征也是一样，记为POP`序列。 整合酶和 IHF 在 att 上都有特定的结合位点。每一次整合的重组过程需要20－40个整合酶分子和约70个IHF分子。说明这两种蛋白不仅仅是酶（起催化作用），而且在形成某种复合物结构中起着重要作用。 ;2、?DNA的整合与切出;3、?原噬菌体与合子诱导;第五节：环状排列与末端重复;5`GTAGATC——————CACTGAG3` 3`CATCTAG——————GTGACTC5`;3、T2噬菌体的末端重复与末端沉余;;;不同速溶菌的突变型在表现型上不同，可分别写成ra-、rb-、rc-等，用rx–h+×rx+h-　获得试验结果列于下表： 杂交组合　　　　各基因型（%）　　 重组值 　　　　　　r-h+　r+h-　 r+h+　r-h- Ra-h+