第十三章-生化药物制造工艺--核酸类药物.pptVIP

2021/3/17 * （二）阿糖腺苷Adenine arabinoside 1、结构与性质 阿糖腺苷的化学名称为9-β-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤,或称腺嘌呤阿拉伯糖苷。 早在1960年就在实验室合成了阿糖腺苷,1969年美国用Streptomyces antibioticus NRRL3238菌株,1972年日本用Strepto－myces hebacecus 4334菌株发酵法分别制备了阿糖腺苷。 1979年用 从E．Coli中分离得到的尿嘧啶磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶,以固相酶的方法将阿糖脲苷转化为阿糖腺苷。 2021/3/17 * 2、生产工艺 （1）酶-化学合成法 最新的阿糖腺苷的合成法是酶-化学合成法:用尿苷为原料生成氧桥化合物,水解成阿糖尿苷,经酶法转化成阿糖腺苷。 经选育的优秀菌株是产气肠杆菌,能产生尿苷磷酸化酶（Upase）和嘌呤核苷磷酸化酶（Pynpase）,从阿糖尿苷和腺嘌呤能高效地合成阿糖腺苷,菌体也可制成固定化细胞进行连续生产。 2021/3/17 * 2021/3/17 * （2）以5`-AMP为原料的化学合成 3、作用与用途 阿糖腺苷是近年来引人注目的广谱DNA病毒抑制剂,对单纯疱疹Ⅰ、Ⅱ型,带状疱疹,巨细,牛痘等DNA病毒,在体内外都有明显抑制作用。 而且阿糖腺三磷对于病毒DNA聚合酶的亲和性比宿主细胞的同一个酶的亲和性高。因此这个药物对于抑制病毒具有较高选择性。 2021/3/17 * （三）三氮唑核苷 1、结构与性质 三氮唑核苷商品名病毒唑,对DNA病毒,RNA病毒都有广泛作用。 这个化合物在体内被磷酸化成三氮唑核苷酸,抑制病毒DNA合成。 2021/3/17 * 2 生产工艺 酶合成法 使用产气肠杆菌,以（尿苷）肌苷和TCA（三叠氮羧基酰胺）为底物可以用酶法简易地合成三氮唑核苷 2021/3/17 * 采用前段与后段由两个不同的酶催化,即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶,后段使用嘌呤核苷磷酸化酶。 四、阿糖胞苷 ?（一）结构与性质 阿糖胞苷又称胞嘧啶阿拉伯糖苷,糖的组成部分是阿拉伯糖。 阿糖胞苷进入体内转变为阿糖胞苷酸,抑制DNA聚合酶,抑制DNA的合成,干扰DNA病毒繁殖和肿瘤细胞增殖。 2021/3/17 * （二）生产工艺 1．以5＇－CMP为原料的合成法 （1）工艺路线: 2021/3/17 * 2、以葡萄糖酸钙为原料的合成路线 2021/3/17 * （五）聚肌胞苷酸（聚肌胞） 1、结构与性质 1967年美国人Field发现聚肌胞是干扰素诱导物,而且具有广谱抗病毒作用。本品是人工合成的干扰素诱导剂,系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸组成的双股多聚核苷酸。本品可溶于0.85％氯化钠溶液。 2、生产工艺 聚肌胞生产工艺如下: 1）底物5-核苷二磷酸吡啶盐的制备 2）固定化多核苷酸磷酸化酶 2021/3/17 * （3）固定化多核苷酸磷酸化酶,将分离纯化的酶液滴加入冰浴中的载体,得到共价结合的固定化多核苷酸磷酸化酶。 3、Poly I:C制备 （1）底物预处理:CDP吡啶盐转成锂盐,IDP吡啶盐转成钠盐。 （2）酶促反应: （每毫升反应液含μmol／L数）IDP或CDP 15;Tris 150;MgC126;? 2021/3/17 * EDTA 1;聚合酶5单位,pH9.0,37℃,3～4小时。用盐酸调pH1.5～2.0,使PolyI（或Poly C）沉淀,立即离心。此后在磷酸液冲液中溶解,等摩尔Poly I与Poly C混合,生成产品 。 （三）作用与用途 本品具有抗病毒,抗肿瘤,增强淋巴细胞免疫功能和抑制核酸代谢等作用。本品注入人体诱导产生干扰素。 2021/3/17 * 六、胞二磷胆碱（CDP-胆碱） ?（一）结构与性质 胞二磷胆碱其化学名称为胞嘧啶核苷-5＇-二磷酸胆碱钠盐本品为白色无定形粉末,易吸湿,易溶于水,几不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多数有机溶剂。 2021/3/17 * （二）生产工艺 1、酶合成法 胞二磷胆碱由微生物菌体所提供的酶系催化胞苷酸和磷酸胆碱而合成,国内使用啤酒生产中废弃的酵母,反应体系为: 磷酸二氢钾～氢氧化钠缓冲液（pH8.0）200mol／ml,CMP 20μmol／ml, 磷酰胆碱 30μmol／ml, 葡萄糖 1000μmol／ml,MgSO4.7H2O 20μmol／ml,酵母泥 550mg／m1。 上述反应体系于28℃保温20小时,胞二磷胆碱对胞苷酸的收率为80％。 2021/3/17 * 2．粘性红酵母发酵法 国外发现一株粘性