苯酚法测定可溶性糖.docVIP

精品整理 苯酚法测定可溶性糖 【原理】 植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100μg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。 【仪器 与用具】 分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。 【试剂 】 1．90%苯酚溶液 称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月； 2．9%苯酚溶液 取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用； 3．浓硫酸（比重1.84）； 4．1%蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度； 5．100μg/ml蔗糖标准液 精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。 【方法】 1．标准曲线的制作 取20ml刻度试管 11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表24-1 各试管 加溶液和水的量 管 号 0 1～2 3～4 5～6 7～8