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- 2021-03-22 发布于广东
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蛋白质及蛋白质含量测定的几种方法
蛋白质是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。蛋白质主要用于维持、生长、妊娠和泌乳等需要。因此蛋白质含量的检测成为一项日常性且必需性的工作。
蛋白质含量测定的几种方法
1紫外分光光度法
蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值,在一定的范围内,蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比,可作定量测定。该法操作简单、快捷,并且测定的样品可以回收,低浓度盐类不干扰测定结果,故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。但此方法存在以下缺点:
1.当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大会产生一定的误差,故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。
2.若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物,就会出现较大的干扰。但核酸的吸收高峰在260nm,因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值,通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的,虽经校正,测定结果还存在着一定的误差。
1Bradford法
1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理,是一种能够迅速并且准确的定量蛋白质的方法。染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变,从465nm变为595nm。蛋白质-染料复合物具有高的消光系数,因此大大提高了蛋白质测
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