动物微生物与免疫技术任务十病毒的血凝与血凝抑制试验技能点7病毒的血凝抑制试验.pptVIP

技能点7 病毒的血凝抑制试验 主要内容 目的要求 仪器及材料 方法与步骤 结果判定 注意事项 一、目的要求 熟练掌握病毒的血凝抑制试验（微量法）的操作方法及结果判定，明确其应用价值。 二、仪器及材料 4单位的新城疫病毒液、待检血清、生理盐水、1%鸡红细胞悬液、微量血凝板（V型96孔）、微量移液器（带吸头）、微型振荡器等。 三、方法与步骤 加生理盐水 用微量移液器向反应板1～11孔分别加生理盐水25μl，12孔加50μl 。 待检血清的倍比稀释 换一吸头吸取25μl 待检血清，加于第1孔的生理盐水中，然后依次倍比稀释到第10孔，第10孔中液体混匀后从中取出25μl 弃去，第11孔为病毒对照，第12孔为生理盐水对照。 三、方法与步骤 加4单位新城疫病毒液 换一吸头吸取4单位的新城疫病毒液依次加入1 ～ 11孔中，每孔加25μl 。加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡混匀1min。 反应 振荡混匀后置室温（20-25℃）反应30 ～ 40min，或置4 ℃ 反应60min。 三、方法与步骤 加1%红细胞悬液 换一吸头吸取1%红细胞悬液依次加入1 ～ 12孔中，每孔加25μl 。加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡混匀0.5min。 反应 振荡混匀后置室温（20-25℃）反应40min，或置4 ℃ 反应60min。 四、结果判定 完全凝集：红细胞呈伞状均匀分布于孔底 四、结果判定 血清的血凝抑制效价（血凝抑制滴度）：以完全抑制4个HAU抗原的血清最大稀释倍数作为该血清的血凝抑制滴度或血清的血凝抑制效价。以nLog2方式表示血清的血凝抑制滴度。 四、结果判定 五、注意事项 微量移液器的正确使用，保证量取液体量准确。 使用1%红细胞之前首先混匀。 勿忘试验中抗原对照孔和生理盐水对照孔的设立。 反应的温度和时间控制好。 六、布置作业 掌握4单位病毒的配制方法。 完成实验报告。 技能点7 病毒的血凝抑制试验 不完全凝集：介于两者之间 完全不凝集：红细胞呈明显纽扣状沉于孔底 以nLog2方式表示血清的血凝抑制滴度。 * * 技能点7 病毒的血凝抑制试验