层析工艺设计以及优化.pptxVIP

层析工艺设计和优化;第一部分 基础理论;分离纯化的一般流程;破碎细胞概述;超声破碎(Ultrasonication);反复冻融法;高压匀浆法;珠磨破碎法;指标;澄清技术概述;分离方法概述;沉淀法;冷乙醇沉淀法制备血浆蛋白;各步所沉淀下来的蛋白;超离心技术;书籍推荐;单元操作－超速离心;超速离心法在疫苗纯化中的应用;浮力密度;沉淀系数的物理意义;区带离心和区带转子;密度梯度离心;转子类型;规模化生产的超速离心机;密度梯度离心－病毒颗粒的制备;密度梯度的加样量;蔗糖密度梯度离心;CsCl等密度梯度离心的条件摸索;等密度离心介质的筛选;单元操作－超滤;膜分离特点;微滤和超滤;影响分离的因素;浓度极化;膜的污染;层析的分类;吸附解吸类层析;层析的影响因素;常用的基本概念;速率方程各项的意义;液相色谱系统组成;凝胶过滤层析;凝胶过滤层析的用途;GF基本操作程序;凝胶过滤层析中的基本概念;分离度和柱效;介质的特点;影响凝胶过滤层析的因素;颗粒大小的影响;样品体积对于分辨率的影响;样品浓度的影响;使用注意事项;蛋白质的吸附解吸类层析;离子交换层析;离子交换层析的用途;强和弱的区别;常用的类型;常用的电荷基团;pH值对蛋白质电荷的影响;利用pH值提高选择性;不同缓冲体系的缓冲能力;阴离子交换可选缓冲体系;阳离子交换可用缓冲体系;使用pH值应注意的地方;pH值筛选过程;pH值筛选过程;不同的洗脱方式;蛋白质层析中的线性洗脱和阶梯洗脱;盐类型的影响;离子交换层析小结;疏水相互作用层析;疏水层析的用途;疏水配基类型的影响;盐浓度的影响;盐类型的影响;Franz Hofmeister;疏水层析最佳条件的选择;疏水层析最佳条件的选择;疏水层析最佳条件的选择;反相层析简介;亲和层析;典型的洗脱图形;配基的选择;常用配基类型;基质的选择;影响亲和层析的因素;介质与配基的键合;应用实例－单克隆抗体;应用实例－组氨酸标记融合蛋白;第二部分 应用部分;分离纯化在生物药品中的作用;关于纯化技术认识误区;关于纯度的认识误区;蛋白质纯化的核心问题;层析技术的分类;蛋白质纯化与小分子纯化的差别;温度的影响;停留时间的影响;盐的类型和浓度的影响;载量的影响;层析过程的放大;分离纯化三步曲;综???考虑各种因素;重组乙肝病毒表面抗原纯化工艺;最终纯品的鉴定;几个常被忽略的注意事项;实际工艺举例;木糖还原酶的纯化方法-1;木糖还原酶的纯化方法-2;木糖还原酶的纯化方法-3;工艺路线设计;离子交换层析的优化;疏水相互作用层析的优化;工艺整合层析谱图;产品鉴定：HPSEC-UV;产品鉴定：SDS;兔肌乳酸脱氢酶的纯化——Hitrap的高效使用;组分IV的综合利用——提取工艺;乙肝病毒表面抗原的纯化;EV71病毒颗粒的纯化;蛋白质变性;蛋白质聚集;蛋白质的化学稳定性;脱酰胺反应;氧化;二硫键的断裂和形成;非二硫键交联;去糖基化;影响蛋白质稳定性的物理因素;蛋白自身性质的影响;溶液环境-1;溶液环境-2;吸附、振动和剪切;添加剂对于蛋白质的稳定作用－1;添加剂对于蛋白质的稳定作用－2;添加剂对于蛋白质的稳定作用－3;添加剂对于蛋白质的稳定作用－4;PEG的作用实例;结构修饰对于蛋白质的稳定性－1;结构修饰对于蛋白质的稳定性－2;结构修饰对于蛋白质的稳定性－3;二级结构－红外光谱;二级结构－红外光谱;二级结构－远紫外圆二色谱;二级结构－拉曼光谱;侧链微环境检测－荧光光谱;侧链微环境检测－荧光光谱;侧链微环境检测－近紫外圆二色谱;三级结构的检测—X射线衍射;三级结构的检测—X射线衍射;四级结构的检测;多角度激光散射;多角度激光散射;多角度激光散射;相关函数和动态光散射;相关函数和动态光散射;蛋白质变性的检测方法;确定蛋白质的变性温度;吸附状态下蛋白质结构的检测;吸附状态下蛋白质结构的检测;吸附状态下蛋白质结构的检测;仪器检测部分小结;谢谢大家！;使用注意事项;离子交换层析小结;疏水层析最佳条件的选择;典型的洗脱图形;第二部分 应用部分;蛋白质纯化与小分子纯化的差别;蛋白质聚集;谢谢大家！