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Document number【AA80KGB-AA98YT-AAT8CB-2A6UT-A18GG】 Document number【AA80KGB-AA98YT-AAT8CB-2A6UT-A18GG】 western的操作步骤 Western Blot操作全过程 收蛋白 a（如果要收集死细胞） 取冰，将4°C离心机提前降温。 将死细胞收集到离心管：孔板内的细胞用PBS洗1-2遍，用适量的胰酶消化，用离心管内的原培养液将孔板内细胞吹打下来，收集到离心管，室温离心1000rpm，5min。 弃上清，将离心管倒扣在滤纸上，尽量吸尽残留上清。 视细胞量的多少加入细胞裂解液。（1×Cell Lysis Buffer：PMSF=100：1，1×Cell Lysis Buffer，PMSF-20°C保存。PMSF常温易降解，拿出时间不得超过30min，必须放置冰上。） 冰上裂解15min，将裂解液转移至EP管离心，4°C，12000rpm，15min。 小心将上清转移至另一EP管，记下吸取的量。如：100μL。 将收集好的蛋白保存与—20°C。（可长期保存） b （如果不收集死细胞） 1．弃上清，孔板PBS洗1-2遍，吸尽PBS。在孔板中视细胞量的多少加入相应细胞裂解液。（同上） 2．冰