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田旋花EPSPS基因表达载体的构建及拟南芥转化 Construction of Expression Vector of Convolvulusarvensis EPSPSand Transformation of Arabidopsis thaliana ZHOUXin-xin1 ， HUANGZhao-feng2 ， ZHANGJia1 ， ZHANG Jing1 ， ZHANG Chao-xian2 ( 1.Institute for the Control of Agrochemicals ，Ministry of Agriculture ， Beijing 100125 ， China ；2.Institute of Plant Protection ，Chinese Academyof Agricultural Sciences ，Beijing 100193 ，China ) ：Based on the EPSPS gene cDNA ( GenBank accession number： EU698030) from field bindweed ( Convolvulus arvensis L. )，specific primers containing enzymedigestion sites were designed. With the template of cDNA from field bindweed ，an EPSPS gene was obtained and inserted into plasmid pBI121 that contains promoter 35S and GUS gene. A plant super expressed vector of pBI-EPSPS was constructed successfully and transferred to Arabidopsis thaliana by the Agrobacterium tumefaciens mediated transformation system. Fifteen transgenic plants were finally obtained ， and five of them were analyzed by PCRand RT-PCR. The EPSPS gene was integrated into the genomeof Arabidopsis thaliana and could be expressed. 自 1996 年全球第 1例抗草甘膦转基因大豆商品化种植以来， 转基因技术在全球得到了迅猛发展。 转基因作物转入的性状主要 有耐除草剂、抗虫、抗病、抗逆境等，耐除草剂性状一直都占首 要地位，其中，尤以耐草甘膦转基因性状居首 [1] 。草甘膦抑制 植物体内 5- 烯醇式丙酮酸 -3- 磷酸合成酶 (5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase , EPSPS 的 活性 [2] ，具有广谱、高效、低毒、低残留等特性，是使用范围 最广、用量最大的除草剂 [3-6] 。目前，全球耐草甘膦作物主要 有大豆、玉米、油菜、棉花和苜蓿，此外还有耐草甘膦转基因马 铃薯、小麦、甜菜 [1] 。 田旋花( Convolvulus arvensis L. )属旋花科旋花属植物， 是世界重要的多年生恶性杂草之一。 该杂草地下根系发达， 以地 下根芽及种子进行繁殖，生命力极强 [7] ，对草甘膦具有天然耐 药性 [8] ，防除困难。近年来，田旋花在我国发生和危害日趋严 重，在华北小麦田、新疆棉田等已成为优势杂草。 关于田旋花耐草甘膦机制的研究主要集中在非靶标耐药性， 认为对草甘膦吸收和传导的差异并不是田旋花耐药性的原因 [7-9] 。在草甘膦靶标耐药性方面，刘延等克隆了田旋花 EPSPS 基因(Gen ba nk登录号：EU698O30，但在已证实导致抗性的氨 基酸位点(如 102位和 106位)未发现突变 [10] 。张猛比较了不 同田旋花种群耐药性水平，并测定了草甘膦处理前后 EPSPS基因 表达的差异[11]。本试验克隆了田旋花 EPSPS基因的编码区，构 建了植物超表达载体35S:: EPSPS并转化拟南芥，最终获得转 EPSPS基因拟南芥，为探讨田旋花靶标耐药性机制提供了试材， 并为培育耐草甘膦转基因作物提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料 田旋花种子采自北京海淀区上庄镇。 拟南芥种子为笔者所在 研究室保存。 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens )菌株 GV3101 及 pBI121 载体由中国农业科学院畜牧研