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乙型肝炎病毒（HB）YMDD基序突变检测标准操作规程 P PAGE 2 乙型肝炎病毒（HBV）YMDD基序突变检测标准操作规程（PCR-反向斑点杂交法） 1.目的:规范乙型肝炎病毒（HBV）YMDD基序突变检测标准操作规程，保证检测结果的准确性。 2.应用范围: PCR实验室。 3.职责: 3.1 文件编写：实验室技术员。 3.2 文件审核：实验室主管。 3.3 文件审批：实验室主任。 3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。 4. 参考文献: 4.1《中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒YMDD基序突变检测试剂盒说明书》 4.2《中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书》 5. 内容: 5.1 检测方法：PCR-反向斑点杂交法。 5.2 实验原理：选取乙型肝炎病毒（HBV）核酸拉米夫定基因组保守序列为扩增靶序列，设计通用引物和特异型别探针（L180、M180、M204、I204、V204型）。利用生物素标记的通用引物对cDNA进行PCR扩增，得到的产物与固定在膜上的特异型别探针按照碱基互补配对的原理杂交。若PCR产物和探针完全配对，则膜条上相应探针位置捕获到标有生物素的PCR产物，并和亲和素–辣根过氧化物酶偶联，再与四甲基联苯胺（TMB）反应呈现较强的深蓝色，若与探针不完全配对，则经严格杂交和洗涤后膜条上相应探针位置不能捕获到标有生物素