包含体纯化步骤(精).docxVIP

同样采用 Ni-NTA His 结合树脂亲和纯化重组目的蛋白， 1、 200mL菌液离心收集大量诱导的菌体，并用 1X PBS缓冲液洗涤两次。 2、 将保存的菌体沉淀用总体积为 20mL的1 X Bi nd Buffer (300mMNaCI,50MnNaHP04; 10mM imidazote,pH8.0) 重悬，在冰浴中超声波破菌至溶液呈白色澄清。 3、 4C 12,000 rpm 离心30分钟，然后用 20mL的包涵体洗涤 Buffer (50mmol/L Tris-HCl , 100mmol/L NaCl, 1mmol/L EDTA 0.5% Triton x-100 , pH8.0)洗涤沉淀两 次。 4、 力卩 20mL的包涵体溶解 Buffer (50mmol/L Tris-HCl , 100mmol/L NaCl, 8mol/L Urea, pH8.0)充分溶解，(旋涡溶解，最好溶解时间长一点，1h左右，也可以用冰盒 装放摇床上1h ), 4C 10,000 r/min 离心30min,收集上清。 亲和层析纯化表达的蛋白 pQE40和pET-32a(+)载体表达的蛋白C、N端均融合了 6个组氨酸的tag，可用金 属螯和层析纯化， 也可用抗 6个组氨酸的单克隆抗体检测表达蛋白的正确性。 根据表达 蛋白的溶解情况分两种方法对蛋白进行纯化。 天然条件下纯化可溶形式的目的蛋白