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二、微生物发酵的一般过程 3 菌种的保藏 （1）斜面低温保藏法 （2）液体石蜡封藏法 （3）甘油冷冻保藏法 （4）冷冻干燥保藏法 （5）液氮超低温保藏法 （6）其他干燥保藏法 （二）培养发酵 根据微生物的特性、代谢规律和产品特点来选择合适的发酵设备和发酵条件。 （三）发酵产品下游的加工过程 下游加工过程（down stream processing）:从微生物发酵液中分离、精制生物产品的过程。 包括：发酵液预处理、初步纯化、高度纯化（精制）、成品加工 （四） 废弃物处理 废弃物：原料处理过程中剩下的废渣； 产品分离和提纯过程中剩下的细胞、废渣和废母液； 生产过程中各种洗涤水、冷却水 BOD（生化需氧量）：表示水中有机物等需氧污染物质含量的一个综合指示水中有机物，由于微生物的生化作用进行氧化分解，使之无机化或气体化时所消耗水中溶解氧的总数量。 COD（化学需氧量）：化学需氧量是以化学方法测量水样中需要被氧化的还原性物质的量。水样在一定条件下，以氧化1升水样中还原性物质所消耗的氧化剂的量为指标。 第二节 微生物细胞培养技术 人工配置的适合不同微生物生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质称为培养基。 第一节 培养基的组成 一、培养基的营养成分 微生物的营养活动，是依靠向外界分泌大量的酶．将周围环境中大分子的蛋白质、糖类、脂肪等营养物质分解成小分子化合物，再借助细胞膜的渗透作用，吸收这些小分子营养来实现的。 所有发酵培养基都必须提供微生物生长繁殖和产物合成所需的能源，包括碳源、氮源、无机元素、生长因子及水、氧气等。对于大规模发酵生产，除考虑上述微生物的需要外，还必须重视培养基原料的价格和来源。 （1）碳源： 碳酸气； 淀粉水解糖，糖蜜、亚硫酸盐纸浆废液等 石油、正构石蜡，天然气 醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品 葡萄糖效应：又称葡萄糖阻遏或分解代谢产生阻遏作用。葡萄糖或某些容易利用的碳源，其分解代谢产物阻遏某些诱导酶体系编码的基因转录的现象。 脂肪作为碳源时需要提供更多的氧。 （2）氮源 豆饼或蚕蛹水解液，味精废液，玉米浆，酒糟水等有机氮 尿素，硫酸铵，氨水，硝酸盐等无机氮 气态氮 迅速利用的氮源 生理酸性物质和生理碱性物质 （3）无机盐 磷酸盐，钾盐，镁盐，钙盐等其他矿盐 铁、锰、钴等微量元素 其他 （4）特殊生长因子 硫胺素、生物素、对氨基苯甲酸、肌醇等 （5）水 二、培养基的种类 筛选菌种 保藏菌种 检验杂菌 培养种子 发酵生产 （一）培养基的分类 （1）按培养基组成物质的化学成分 合成培养基、天然培养基。 （2）按物理性质 固体，液体 （3）按用途 选择性培养基、鉴别培养基、富集培养基等 （1）天然培养基 是采用化学成分还不清楚或化学成分还不恒定的各种植物和动物组织或微生物的浸出物、水解液等物质(例如牛肉膏、酵母膏、麦芽汁、蛋白胨等)制成的。 适合于各类异养微生物生长，而一般自养微生物都不能生长。 （2）合成培养基 是用化学成分和数量完全了解的物质配制而成的。成分精 确，重复性强，可以减少不能控制的因素 适用于在实验室范围作有关营养、代谢、分类鉴定、生物测定及选育菌种、遗传分析等定量研究工作。 但一般微生物在合成培养基上生长较慢，有些微生物营养要求复杂，在合成培养基上不能生长。 （3）半合成培养基 多数培养基配制是采用一部分天然有机物作碳源、氮源和生长因子的来源，再适当加入一些化学药品以补充无机盐成分，使其更能充分满足微生物对营养的需要。 大多数微生物都能在此培养基上生长繁殖。因此，在微生物工业生产上和试验研究中被广泛使用。 常用于大规模的工业生产及生理代谢等基本理论研究工作。 发酵工业多用作培养种子和发酵的培养基。 根据微生物对氧的要求情况，分别作静止或通风搅拌培养。 在菌种筛选工作和菌种培养工作中，也常用液体培养基进行摇瓶培养 微生物在液体培养基中生长的情况有时也可用作鉴定菌种的参考。 分类：斜面试管、平板等 是在液体培养基中加入凝固剂配成的，最常用的凝固剂是琼脂。 作用： 固体培养基在菌种的分离、保藏、菌落特征的观察、活菌计数和鉴定菌种方面是不可缺少的。 在制曲、酶制剂、柠檬酸等生产中，用来培养霉菌等的固体种子和发酵培养基是由麸皮等农作物加无机元素等制成的。 增殖培养基：可以配制成适合某种微生物生长而不适合其他微生物生长，从而达到从自然界分离这种微生物的目的。 鉴别培养基：是根据微生物能否利用培养基中某种营养成分，借助指示剂的显色反应，以鉴别不同种类的微生物。 选择培养基：是在培养基内加入某种化学物质以抑制不需要菌的生长，而促进某种需要菌的生长。 （二）、发酵生产中的培养基类型 工业发酵中培养基往往是依据生产流程和作用分为： 斜面培养