利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生.ppt

高能磷酸盐代谢 ATP人体功能直接能量物质 PCr是高能物质ATP的能量贮存库 PCr由ATP及肌酸在线粒体肌酸激酶（mi-CK）的正向催化下生成 衰竭的心脏是无法维持能量贮备 能量指标和心功能指标存在良好的相关性 CK穿梭机制 CK系统：能量的“传输梭”，完成心肌89%的能量转运 肌酸激酶CK由M亚基和B亚基组成，包括CK-MM、CK-BB、CK-MB和mi-CK四种亚型 ATP可被mi-CK从内膜转移并形成PCr PCr在需能部位再经胞质CK同工酶（CK-MM、CK-MB、CK-BB）催化转为ATP以供利用 利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生理机制 * 立 题 依 据 研究内容、目标 实 验 结 果 讨论与结论 内容概述 * 动力泵、 高耗能 能量不足引起的能量超负荷性心肌病 心脏特点 心力衰竭 CHF实质 能量产生不足、消耗增加 立项依据 现代医学对CHF和心肌能量的认识 * 立项依据 1 2 3 4 “气” 能量 相似性 心气虚 CHF 基本病机 中医治疗 CHF 特色优势 益气治疗 CHF 心气虚证 效果显著 中医对“气”和心气虚的认识 * 立项依据 慢性心衰 心气虚证 能量代谢 心肌能量 代谢障碍 ↓ 病理生理 关键环节 心气虚证 ↓ 慢性心力衰竭基本病机 能量代谢障碍 ↓ CHF心气虚证研究的切入点 ADP+ Pi Cr+ Pi ATP PCr CK穿梭机制 心肌能量代谢及其调控机制 直接能量物质 能量储备物质 mi- CK CK-MM/MB/BB 立项依据 血流动力学 能量调控-CK穿梭机制 能量物质-ATP、PCr 提高能量物质含量 维持CK穿梭机制 益气药通过提高心肌能量物质含量、维持CK穿梭机制治疗心气虚证 心气虚证 提出假说 * 研究内容 复制CHF心气 虚大鼠模型 益气药物治疗 模型大鼠 心气虚证指标 血流动力学 慢性心衰 心气虚证 心肌能量代谢障碍 CHF不同时相 心肌能量物质 动态变化 能量调控机制关键分子 基因表达水平 心气虚 * 动物实验 造模、干预、血流动力学 分子生物学 基因及蛋白质表达 核磁共振 心肌能量物质水平 理论升华 心气虚证实质 从心肌能量代谢角度进一步阐明心气虚证实质 研究目标 假手术 结扎冠脉 左心室插管 RT-PCR 31P核磁共振波谱 技术路线 * 研究方案-动物分组 动物实验 分组及给药 L M Z X J 假手术组：不结扎冠状动脉，术后给予生理盐水 联合用药组：术后给予党参、黄芪＋卡托普利 中药组 亚组1:术后予党参； 亚组2:术后予黄芪； 亚组3:术后予党参＋黄芪 （益气组） 模型组：术后给予生理盐水 西药对照组：术后给予卡托普利 * 心率加快 a 心悸 呼吸频率加快 b 气短、气促 活跃程度下降反抗轻微 c 神疲 力竭性游泳时间缩短 d 乏力 研究方案-一般状态 检测指标 心气虚证 * 研究方案-血流动力学 监测心电 颈动脉插管 心室内压 舒缩功能 心脏功能 左室舒张末压 血流动力学检测 左室收缩压 左室收缩压最大变化速率 左室舒张压最大变化速率 收缩功能 舒张功能 * 保存 提取 样品 制备 实验 参数 数据 处理 核磁共振波谱检测流程 大鼠心脏组织液氮急冻。用1:1的CH3CN:H2O匀浆、离心取上清液 水提残渣加入重水混匀，离心取上清液加入核磁管中，加入TSP/D2O溶液和MDP/D2O溶液（终浓度2mM） 谱宽sw=12000，采样点np=8192，90度脉冲宽度pw=14.1，弛豫延迟时间d1=17s，采样次数nt=100，采样温度为27℃。 对所得NMR数据经傅立叶变换得到谱图，然后调整相位并进行基线校正 研究方案-能量物质 * 研究方案-能量物质 PCr ATP PCr/ATP 31P核磁共振波谱检测 1.心气虚证与心肌能量物质含量的相关性 2.益气药对心肌能量代谢的影响 * 心肌组织 能量调控机制 mi-CK反映能量从ATP→PCr并存储的能力 CK同工酶反映PCr→ATP并加以利用的能力 运用RT-PCR法检测mi-CK和CK-M亚基、CK-B亚基的mRNA表达水平 Western blot法测定mi-CK、CK-MM、CK-MB、CK-BB蛋白质水平 研究方案-分子生物学 分子生物学检测 * 实验结果-心衰模型的建立 心脏冠脉结扎位点 心衰心脏（梗死区清晰可见，左心室扩大、室壁变薄） * 实验结果-一般状态 模型组大鼠较假手术组一般状态差，心率加快，力竭游泳时间缩短，各用药组较模型组有所改善 与假手术组相比， *P0.05，**P0.01；与模型组相比，△P0.05，△△P0.01 * 实验结果-血流动力学 左心室内压曲线 左心室dp/dt曲线 +dp/dt max:收缩功能