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Western Blot 相关技术 原理与技巧 唐波博士 ？ 能做什么？ 为什么？ 怎么做？ 怎么办？ ？ 印迹法（blotting ）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应 的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝 酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA －DNA 杂交检测特定的DN 段的方法，称为 Southern印迹法。 埃德温·迈勒·萨瑟恩（Edwin Mellor Southern） 而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印 迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分 析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为 Eastern印迹法。 能做什么？  为什么要作蛋白质印迹实验？  研究一些体外的蛋白质分子，寻找目的蛋白是否存 在样品当中  蛋白质的表达情况，上调或下调表达，在不同的样 品中，如疾病和正常的样品之间的表达差异性。 DNA重组技术 siRNA的转染技术 细胞信号通路蛋白 凡是涉及蛋白水平检测的研究，均可运用到western blot技术 技术路线 1.提取细胞 或组织蛋白， 测定总蛋白 浓度 2.测定总蛋白浓 度，并处理样品 3.通过电泳将蛋白样 4.将电泳分离的蛋 5.印迹首先用封闭液（如5 6.最后加上相应的 品分开。 白从凝胶转移至一 ％的脱脂奶粉）处理以封 底物溶液，当二抗 种固相支持体.转移 闭固相载体上剩余的疏水 上的酶催化底物产 后的硝酸纤维素膜 结合位点，而后用目的蛋 生化学发光时,用X 就称为一个印迹 白的抗血清（一抗）孵育， 光片曝光，洗片后 （blot ），用于对 印迹中只有目的蛋白质与 就会产生可见的区 蛋白质的进一步检 一抗特异性结合。洗去游 带，指示目的蛋白 测。 离的一抗后，用再与酶标 质的位置和强弱。 记的二抗孵育 Western Blot基本原理 在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种 固相支持体，然后用这种蛋白的特异抗体来检测。 Western Blotting 方法一: 直接法  优点：  1.快速（一种抗体）  2.没有二抗交叉反应引起的非 特异性条带  缺点：  1.免疫反应性降低  2.无信号二级放大  3.抗体标记费时昂贵,使用不方 便 Western Blotting 方法二: 间接法  优点：  1.