植物转基因育种技术.pptxVIP

1 转基因技术 与作物育种 2 转基因育种的概念与优点 转基因育种技术的一般操作过程 转基因育种技术的应用成果 转基因的安全性 3 作物转基因育种 就是根据育种目标，从供体生物中分离目的基因，经 DNA重组与遗传转化或直接运载进入受体作物，经过筛选获得稳定表达的遗传工程体，并经过田间试验与大田选择育成转基因新品种或种质资源。 转基因作物（GMC，genetically modified crops） 第一节 植物转基因育种概念及优点 4 与常规育种技术相比，转基因育种在技术上较为复杂，要求也很高，但是具有常规育种所不具备的优势： 1.拓宽可利用的基因资源； 2.培育高产、优质、高抗优良品种提供了崭新的育种途径； 3.可以对植物的目标性状进行定向变异和定向选择； 4. 可以大大提高选择效率，加快育种进程。 此外，还可将植物作为生物反应器生产药物等生物制品。 5 Traditional crossbreeding Recombinant DNA techniques 6 第二节 植物转基因技术的一般操作过程 7 8 技术路线 目的基因分离 植物表达载体的构建 受体材料的准备 遗传转化 转化组织 组织脱分化 转化植株筛选 炼苗 9 1.目的基因的分离 （1）已知基因的获得 ①化学合成法 ②PCR扩增 （2）未知基因的获得 ①构建基因组文库，筛选目的基因 ②构建cDNA文库，筛选目的基因 ③mRNA差异显示技术筛选差异表达基因 ④差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 …… 10 ⑦ ①银杏叶RNA提取 ②反转录cDNA ③chs全长cDNA的克隆 ④TA克隆及测序 ⑤向chs两端引入酶切位点 ⑥双酶切 ⑦定向克隆 ⑧导入农杆菌 2.植物表达载体的构建 11 3.受体材料的准备 细胞的全能性：分化细胞脱分化 再分化 12 4.遗传转化 （1）间接转化法——农杆菌介导转化法 （2）直接转化法 A、 基因枪转化法 B、 电击法 C、花粉管通道法 D、 PEG介导基因转化法 13 根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens),是一种革兰氏阴性土壤杆菌,它含有Ti质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤.Ti质粒(包括Ri质粒)上有一段转移DNA,在农杆菌侵染宿主植物时,这段DNA可以转移进植物细胞,并稳定地保留在植物细胞染色体中,变为植物细胞新增加的一群基因,最终能通过有性世代遗传给子代 。 返 回 14 基因枪转化法由美国Cornell大学的Sanfor (1987)提出,它的主要原理是将包含目的基因的载体包被在微小的金属微粒(钨粒或金粒)表面,通过高压驱动力加速微粒穿透植物细胞壁,导入受体组织细胞内,然后通过组织培养再生出完整的植株.微粒上的外源DNA进入细胞后,整合到染色体上并得到表达,从而实现基因的转化.。 返 回 15 电击法的主要原理是将原生质体在溶液中与DNA混合,然后利用高压电脉冲作用,使原生质体膜的某些部位被击穿而产生可回复的小孔,外源DNA可通过小孔进入原生质体内,而且不影响经电击处理的原生质体再生植物的能力. 返 回 16 花粉管通道法是利用开花植物授粉后形成的花粉管通道,直接将外源目的基因导入尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞,实现目的基因转化. 返 回 17 PEG介导基因转化的主要原理是聚乙二醇(PEG)、多聚-L-鸟核苷酸(pLO)、磷酸钙及高pH值条件下诱导原生质体摄取外源DNA分子.PEG可促使细胞膜与DNA间接触与粘连,并通过引起膜表面电荷的紊乱及干扰细胞间的识别,利于细胞膜间的融合以及外源DNA进入原生质体. 返 回 18 表1 几种植物转基因方法比较 转基因方法 转化的优点 转化的缺点 DNA间接转化法 农杆菌介导基因转移 受体种类，可以在原生质体、蛋细胞和细胞团、组织器官或整株等多级水平上进行，方法成熟可靠，简便易行，周期短，转化率高； 转化双子叶植物为主。大多数单子叶植物和裸子植物对农杆菌的侵入不敏感，限制了该法在禾谷类作物中的应用。 转化体常出现“嵌合”现象，需在严格条件下加以选择以淘汰未转化细胞 DNA直接转化法 （1）基因枪转化法 （2） 电击法 （3） PEG介导基因转化法 （4）花粉管通道法 无宿主限制，适用于各种单、双子叶植物，操作简单 转化效率低，需要专门设备（电击仪、显微操作仪或基因枪），多数需要原生质体与愈伤组织，周期太长（电击法） 19 5.转化组织 ——农杆菌介导之叶盘转化法 带有转化基因的农杆菌活化 受体植物 叶盘 侵染 共培养 筛选培养 诱导成苗 20 21 22 6.炼苗 23   一、转基因技术的发展现状 第