原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
RT-PCR内参基因选择：除了β-actin还能用什么？
Q1：要做Real-Time PCR，而该种的β-actin未确定，我知道一般用持家基因作内参，但似乎其他基因各有缺点，有的作者用他们做内参时被SCI杂志要求用两个内参以证实，我想知道的是除了β-actin，哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)?
A1：28S和18S rRNA
甘油醛-3-磷酸脱氢酶
还有α-tublin,ubIQuitin,GAPDH,histone
Q2：做相对定量real-time PCR时，本人不懂操作，将beta-actin内参设置成target了，现在跑完了，有扩增曲线图，和融解曲线，但没法导出Ct值(SDS 1.4版本的软件)， 请教大虾们有没有补救办法，还是只能重新跑了?
黑色的就是我的beta-actin内参
A2：重新设置一下不行吗?荧光信号已经收集了。不用重跑
Q3：最近在做RT-PCR，但始终摸不清β- actin的意义。哪位可以详细介绍一下β- actin作为内参照的意义?它与目的核酸片段的对比能说明什么问题?谢谢。
A3：1.内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指持家基因(Housekeeping Genes)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
2.RT-PCR比较不同条件下或者不同组织中，目的基因表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。
3. beta-actin(细胞骨架蛋白)就是这样一种管家基因，它是细胞骨架微丝的基本构成单位，在各种细胞中表达一般恒定而较少变化，所以常用作RT-PCR等的内参。比较各组目的产物与其内参的比值就是相对定量啊。
real-time PCR实验中要求有内参作为参照，内参基因通常选择持家基因，如β-actin是较常用的内参基因，因为它在各种细胞中的表达量一般是比较恒定不变的，因此是作为内参基因的首选。
文档评论（0）