抗小鼠小肠损伤的机制及其与寡肽转运体表达和功能变化的关系.docxVIP

大连医科大学 硕士学位论文 JBP485抗小鼠小肠损伤的机制及其与寡肽转运体PERT1表达和功 能变化的关系 姓名：王威 申请学位级别：硕士 专业：药理学 指导教师：刘克辛 201106 JBP485抗大鼠小肠损伤的机制及其与寡肽转运体 JBP485抗大鼠小肠损伤的机制及其与寡肽转运体 PEPTl表达和功能变化的关系 硕士生姓名： 王威 指导教师： 刘克辛教授 专业名称： 药理学 摘 要 目的：非甾体类抗炎药(non．steroidal antiinflammatory drugs， NSAIDs)如吲哚美辛、阿司匹林等，临床使用常引起胃肠道损害等副作 用。PEPTl是位于小肠刷状缘膜的寡肽转运体，介导蛋白消化产物及类肽 药物的摄取和转运。营养不良及代谢失调均可引起PEPTI基因和蛋白表达 发生变化，一些临床常见病如溃疡性结肠炎等也可诱导肠道PEPTl的表达 和功能发生改变。JBP485(eyclo．trans．4．L．hydroxyprolyl．L．serine； 环状 一反式一4一左旋一羟脯氨酸一左旋丝氨酸)是一种二肽(dipeptide)， 从日本抗肝炎药物Laennee(人胎盘水解物)中分离，具有一定的抗炎活 性。本课题旨在研究JBP485对吲哚美辛诱导的肠损伤是否有保护作用以及 是否会影响PEPTl表达和功能发生相应变化。 方法：动物实验：按不同给药方式将大鼠分为正常对照组、模型组、 JBP485治疗组和JBP485对照组。吲哚美辛给药24小时后，分别记录各组大 鼠腹泻情况；将大鼠用乙醚麻醉后取空肠肠段观察溃疡情况；通过病理切 片观察肠黏膜的组织形态学变化；分别测定肠黏膜中的髓过氧化物酶 (MPO)活性和丙二醛(MDA)含量；各组大鼠在吲哚美辛灌胃给药24 小时后，分别进行体内口服吸收、离体翻转肠和原位单向空肠灌流实验； 分别提取各组大鼠肠黏膜的总RNA和蛋白，进行RT-PCR和Western blot实 验测定各组大鼠PEPTl的mRNA和蛋白表达情况。 细胞实验；将于24孔板培养14天的Caeo．2细胞按不同给药方式同样分 为正常对照组、模型组、JBP485治疗组和JBP485对照组。分别测定细胞乳 酸脱氢酶(LDH)释放率和丙二醛(MDA)含量，并且观察细胞形态学的 改变。采用RT-PCR及Western blot实验测定各组细胞中PEPTl的mRNA和蛋 白表达情况。 结果：1．与正常对照组相比，模型组： (1)大鼠腹泻及溃疡情况显 著增多。光镜下组织形态学和病理学观察可见大鼠小肠组织出现溃疡，溃 著增多。光镜下组织形态学和病理学观察可见大鼠小肠组织出现溃疡，溃 疡中央肠黏膜坏死脱落，绒毛结构消失，黏膜下层充血、出血，淋巴细胞 浸润。肌层充血，未见坏死。形成单层结构的Caeo．2细胞出现空洞，与 细胞培养孔广泛的分离，游离细胞增多。 (2)大鼠小肠MPO、MDA水 平显著升高(p0．01)，Caeo．2细胞的LDH释放率及MDA含量显著增加 (pO．05，p0．01)，表明吲哚美辛能够导致小肠发生脂质过氧化损伤，同 时伴随炎性细胞浸润。(3)大鼠体内口服、离体翻转肠、在体肠灌流实验 表明大鼠小肠对Gly．Sar的摄取能力均显著下降，AUC显著降低(p0．05， p0．01，p0．05)，结果提示吲哚美辛诱导大鼠肠损伤后小肠黏膜上的 PEPTl摄取功能下降。(4)RT-PCR与Western blot结果一致，大鼠小肠 PEPTl和Caco．2细胞中PEPTl表达均下降。结果表明，吲哚美辛诱发小 肠损伤后肠黏膜上的PEPTl表达下降。 2．与模型组相比，JBP485治疗组： (1)大鼠腹泻及发生溃疡例数 显著减少。光镜下组织形态学和病理学观察可见大鼠小肠组织病理改变明 显减轻，绒毛结构缺失显著减少，黏膜下层充血得到缓解，淋巴细胞浸润 不明显。Caco．2细胞破损显著改善，细胞单层结构较完整。 (2)JBP485 能够抑制小肠发生脂质过氧化损伤，减少炎性细胞浸润，表现为大鼠小肠 MPO、MDA水平显著降低(p0．05)，Caco．2细胞的LDH及MDA水平 显著下降(p0．05)。(3)JBP485给药后增强了吲哚美辛诱导大鼠肠损伤 黏膜上PEPTl的摄取功能，表现为在大鼠体内口服、离体翻转肠、在体 肠灌流实验中大鼠小肠对Gly．Sar的摄取能力均增强，AUC显著增大(P 0．05，p0．01，p0．05)。(4)RT-PCR与Western blot结果趋势相同，JBP485 抑制了吲哚美辛诱导肠损伤黏膜上PEPTl的表达下降，使大鼠小肠PEPTl 和Caco．2细胞中PEPTl表达显著上调。 3．与正常对照组相比，JBP485对照组各项实验结果无显著性差异， 病理学及形态学无明显改变。 结论：