分离技术双水相萃取双水相萃取.pptxVIP

双水相萃取技术 生化固液分离中最困难的操作是从细胞破碎后的浆液中移走细胞碎片，这些碎片分布很广（0.2～1μm），包括细胞壁碎片、膜碎片、完整的细胞器和未破碎的细胞。蛋白质分离该采用什么方法？过滤和离心技术： 适用于固液分离，但依据颗粒尺寸和密度，并不适用于收集微生物细胞器、分离除去细胞碎片、提取和浓缩胞内物质等操作。普通的有机溶剂萃取法：许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶剂蛋白质在有机溶剂相中易变性失活 除了有机溶剂能分相外，在一定条件下，水相也可以形成两相或多相。1896年Beijerinck观察到把明胶与琼脂或把明胶和可溶性淀粉的水溶液混合时，最早发现分成不相溶的双水相。1956年，瑞典伦德大学的Albertsson重新发现此体系并第一次用来提取生物物质。1979年，Kula和Kroner等人将双水相体系用于从细胞匀浆液中提取酶和蛋白质，使胞內酶的提取过程大为改善。2.2%的葡聚糖水溶液与等体积的0.72%甲基纤维素钠的水溶液相混合并静置后，可得到两个粘稠的液层。1、双水相萃取的定义定义：某些亲水性高分子聚合物或亲水性聚合物与无机盐之间，在水中超过一定浓度后可形成不相溶的两相，并且两相中水分占很大比例（85%-95%）的系统2、双水相萃取原理双水相形成原因聚合物的不相溶性，即聚合物分子的空间阻碍作用，相互无法渗透，无法形成均一相，具有相分离倾向，一定条件下分成两相。一般认为，只要两种聚合物水溶液的水溶性有所差异，混合时就可发生相分离，并且水溶性差别越大，相分离的倾向越大。加入盐分，由于盐析作用，聚合物与盐类溶液也能形成两相。双水相萃取的原理生物物质在双水相体系中的选择性分配，当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种作用力（如憎水键、氢键和离子键等）的存在和环境的影响，使其在上、下相中的浓度不同，即分配系数不同。3、双水相相图当两种高聚物的水溶液以不同的比例混合时，可形成均相或两相，将其标绘在直角坐标图上，即为双水相系统相图。反映：双水相形成条件平衡时两相组成间的定量关系4、相平衡关系在同一条系线上的各点分成的两相具有相同的组成，但体积比不同当系线长度趋向于零时，即在图中的C点，两相差别消失，任何溶质在两相中的分配系数均为1，成为单相体系。K=c上/c下5、双水相萃取过程的特点及影响因素分析 （1）双水相萃取的优点 萃取条件比较温和 产品活性损失少，无有机溶剂残留、污染 萃取体系具有较好的可调性 设备投资小、操作简单 含水量高（70%～90%），适宜提取水溶性的蛋白质、 酶等生物活性物质且不易引起蛋白质变性失活 易于放大，各种参数可按比例放大，而产物收率并不降低，这是其他分离技术无法比拟的 （2）双水相萃取的影响因素① 聚合物及其相对的分子量不同聚合物，水相系统显示不同的疏水性，水溶液中聚合物的疏水性也有差别，同一聚合物的疏水性随分子量的增加而增加。随分子量增大，分配系数减小，疏水性增加，亲水性蛋白向另一相转移② pH的影响pH会影响蛋白质中可离解基团的离解度，因而改变蛋白质所带电荷和分配系数；另外，pH还影响系统缓冲物质磷酸盐的离解程度，从而影响分配系数。pH微小的变化有时会使蛋白质的K改变2～3个数量级。体系pH与蛋白质等电点相差越大，蛋白质在两相中分配越不均匀。③ 温度的影响一般都可在室温下操作，而且室温时粘度较冷却时低，有助于相的分离并节约了能源开支。5、双水相萃取的应用条件要成功的运用两水相萃取的方法，应满足下列条件： 欲提取的酶和细胞碎片应分配在不同的相中酶的分配系数应足够大，使在一定的相体积比时，经过一次萃取，就能得到高的收率两相用离心机很容易分离