促进致内质网应激中的表达.docxVIP

万方数据 万方数据 北京协和医学院硕士研究生学位论文 GLS CREs Golgi localization signal cAMP response elements 高尔基体定位信号 cAMP反应原件 PDI Protein disulfide isomerase 蛋白质二硫键异构酶 Treg Regulatory T cells 调节性T细胞 TGF? Transforming growth factor ? 转化生长因子自 HBsAg Hepatitis B surface antigen 乙型肝炎表面抗原 HBcAg HBx Hepatitis B core antigen Hepatitis B virus X protein 乙型肝炎核心抗原 乙型肝炎X蛋白 2 北京协和医学院硕士研究生学位论文中文摘要 北京协和医学院硕士研究生学位论文 中文摘要 研究背景 肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)已经成为一个重大的公共卫生 挑战，给世界造成了巨大的经济负担。HCC的发病率很高，主要分布在发展中 国家。很多因素促成了这种疾病的发生，其中乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus， HBV)感染是很重要的一方面。在全球范围内，HBV的慢性携带者超过3．5亿 人，每年死于HBV感染的人数超过一百万。在中国，HCC通常是由HBV感染 引起的。HBV感染引起大量病毒复制，并在很短的时间内产生大量的病毒蛋白 质，从而影响内质网稳态并引起蛋白质的错误折叠。未折叠或错误折叠蛋白质的 大量积累导致内质网应激(Endoplasmic reticulum stress，ERs)，从而启动细胞内 的未折叠蛋白反应(Unfolded protein response，UPR)。UPR是多个信号转导通 路的总称，在哺乳动物细胞中，可以通过内质网上的三种跨膜感受器蛋白PERK、 IREl、ATF6传递信号，启动一系列反应以缓解内质网应激状态；若应激持续进 行，不能被缓解，细胞随即启动凋亡程序，这在HCC的病程进展中发挥重要的 作用。本研究通过检测在内质网应激时，感染了HBV的HepG2．2．15细胞(HBV+) 与未感染HBV的HepG2细胞(HBV。)中UPR信号分子的表达差异，以探讨 HBV对HCC细胞系UPR信号通路基因表达的影响。 研究方法 分别用ATF6一spliced真核表达质粒、tunicamycin(tin)So thapsigargin(tg)处理 未感染HBV的HepG2细胞(HBV‘)和感染了HBV的HepG2．2．15细胞(HBV十)， 在处理后4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时提取细 胞总RNA。然后通过RT．PCR和qPCR方法分别检测三条未折叠蛋白反应通路， PERK、IREl、ATF6中CHOP mRNA、Xbp—J75mRNA、ATF6 mRNA的表达变化 情况。 研究结果 tg处理细胞后检测三种mRNA的表达水平。发现在HepG2．2．1 5细胞(HBV+) 中，CHOP mRNA表达先升高，后保持不变；Xbp—J5 mRNA在4小时升高后， 持续下降；ATF6 mRNA表达水平一直较低，处于波动状态。而在HepG2细胞 (HBV‘)中，CHOP mRNA表达先升高，后降低；Xbp．，5 mRNA在4小时升高 后直到96小时都变化不大：ATF6 mRNA表达水平也一直较低。两个细胞系中 CHOP mRNA(pO．05)和Xbp—J。mRNA(尸O．05)的表达趋势有显著性差异。 trn和ATF6．spliced真核表达质粒处理后，两个细胞系中，信号分子表达趋势差 异不明显。 3 万方数据 万方数据 北京协和医学院硕士研究生学位论文研究结论 北京协和医学院硕士研究生学位论文 研究结论 本研究发现，tg诱导细胞发生内质网应激后，CHOP mRNA和Xbp．』。mRNA 在感染了HBV的HepG2．2．15细胞(HBV+)和未感染HBV的HepG2细胞(HBV。) 中的表达有显著性差异，提示HBV可能通过促进CHOP mRNA及抑制Xbp．』5 mRNA的表达来促进HCC细胞凋亡。 关键词：乙肝病毒：内质网应激；未折叠蛋白反应；thapsigargin(tg) 北京协和医学院硕士研究生学位论文英文摘要 北京协和医学院硕士研究生学位论文 英文摘要 I-IBV promotes CHOP mRNA expression during thapsigargin induced ER stress Backgrounds Hepatocellular carcinoma(nCC)is a major public health challeng