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浙江大学 硕士学位论文 Kidins220/ARMS在小鼠胚胎干细胞中的功能研究 姓名：周杨 申请学位级别：硕士 专业：细胞生物学 指导教师：张铭浙江丈学硕士学位论文摘要 浙江丈学硕士学位论文 摘要 胚胎千细胞(Embryonic Stem Cell，ESC)是一种特殊的干细胞，具有分化 成三个胚层细胞的潜能和无限增殖的能力，被广泛地应用于发育模型和再生医学 等研究．对ESC自我更新及其调控机制的研究具有重要的意义． 提取小鼠胚胎干细胞(mESC)膜蛋白并行LC-LTQ质谱分析，从mESC上筛选 到Kidins220／ARMS蛋白。RT-PCR方法验证了Kidins220／ARMS在mESC上的表达。 应用杂交瘤技术制备了Kidins220／ARMs的特异性单克隆抗体，免疫荧光化学法 进一步验证了Kidins220／ARMS在mESC上的表达。 应用慢病毒介导的RNA干扰技术，研究了Kidins220／ARMS在mESC增殖中的 功能．结果表明，Kidins220／ARMs的表达被干扰后，mESC的集落明显变小，但 集落形成能力没有发生显著变化。应用细胞计数法绘制mESC生长曲线和MTT法 检测mESC的细胞活性，结果显示Kidins220／AI【Ms干扰后mESC的增殖能力显著 降低． 应用慢病毒介导的RNA干扰技术，研究了Kidins220／ARMs在mESC的全能性 维持中的功能。结果发现Kidins220／ARMs干扰后，mESC碱性磷酸酶的活性无显 著变化．半定量RT-PCR方法检测全能性相关基因，结果发现Oct4、Nanog、Rexl、 Dnmt31、Dppa4等基因的表达水平没有发生显著变化。证明了Kidins220／ARMs 的干扰并不影响mESC全能性的维持。应用半定量RT-PCR方法发现Dppa2、Zfp296 的表达在Kidins220／ARMS干扰显著下调，而Salll的表达则显著上调，提示 Kidins220／aRMS可能调控Dppa2、Zfp296和Sal 11的表达影响mESC增殖。 应用慢病毒介导的RNA干扰技术，研究Kidins220／ARMS在mESC的拟胚体 (EB)的自发分化中的功能。结果发现Kidins220／ARMs的干扰并不影响mESC 形成EB，在贴壁培养条件下Kidins220／ARMs干扰的EB贴壁能力和细胞迁移能 力下降。 综上所述，本研究应用蛋白质组学的方法，证实了Kidins220／ARMs在mES 上的表达．应用慢病毒介导的RNA干扰技术，建立了Kidins220／ARMS干扰细胞 株．研究了Kidins220／AlIMs对mESC的增殖、全能性维持及自发分化中的功能， 发现Kidins220／ARMS调控mESC的增殖，影响EB的自发分化过程，但是并非mESC 全能性的维持所必需的．该研究为mESC自我更新的分子机理提供了新的研究线 Ⅱ 浙江大学硕上学位论文关键词：小鼠胚胎干细胞、Kidins220／ARMS、自我更新、细胞增殖、RNA干扰、 浙江大学硕上学位论文 关键词：小鼠胚胎干细胞、Kidins220／ARMS、自我更新、细胞增殖、RNA干扰、 单克隆抗体 III 浙江人学硕上学化论文Abstract 浙江人学硕上学化论文 Abstract Embryonic stem cells(ESCs)，capability to self-renew and differentiate into cells of all three germ layers，are distiguished from othe stem cellsm．ESCs have been broadly used in development research and reproductive medicine． In present study,we screened kidins220／ARMS protein in mouse ESC(mESCl using LC-LTQ assay．RT-PCR analysis suggested that kidins220／ARMS expressed in mESC．This result was confirmed by immunocytochemistry assay using an anti-kidins220／ARMS monoclonal antibody． Kidins220／ARMS knockdown mESCs were established by lentiviral RNAi system．Kidins220／AItMS knockdown mESCs showed smalle