微生物基本操作规范.docx

v1.0 可编辑可修改 培养基的制备 培养基概念： 是指以液体、半固体或固体形式，包含天然或合成成分，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。 由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。 培养基的分类： 按功能分类：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。 按物理性状分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。 液体培养基：所配制的培养基是液态的， 这种培养基被用来微生物的增菌和生长状态观察。 固体培养基和半固体培养基： 在液体培养基中加入适量的凝固剂制成成固体培养基和半固体培养基。 常用作凝固剂的物质有琼脂。 固体培养基琼脂用量 %，半固体培养基琼脂用量在～ 1%之间。固体培养基用作微生物的分离、鉴定、计数、保藏等。半固体培养基被用来观察微生物的动力和保藏菌种。 今天给大家展示一下各种培养基的制备。 培养基制备的基本过程： 调配成分、溶解、校正 pH、分装、灭菌、质量检查和保存 所需物品：试剂、锥形瓶、天平、量筒、微波炉、高压蒸汽灭菌器、玻璃试管、玻璃平板、接种工具。 1 v1.0 可编辑可修改 （1）调配成分： （2）在锥形瓶或大容量烧瓶中依次加入蒸馏水 200ml， 1 ％蛋白 胨，％ NaCL，％牛肉膏（ g/v ），准确称取各种成分，使其充分混合。 [ 注意事项 ] 培养基调配溶解： 先在锥形瓶底加入少量的蒸馏水， 再加入培养基成分， 以防其粘在锥形瓶底部烧结。 制备培养基时， 除玻璃容器时， 还可用铝锅，搪瓷桶，但不可用铁，铜等容器，以免铁和铜离子进入培养基（培养基中铁离 子含量超过 L 时抑制细菌毒素的产生， 含铜量超过 L 时抑制细菌的生长）。培养基中若需加入染料， 胆盐，指示剂等，应在校正 pH后加入。 3）溶解： 4）将配制好的混合物微波炉加热 8min，使其完全溶解，补足失水。 5）校正 PH： 6）不同的细菌需要在含不同 pH 培养基上生长，一般将培养基的 pH 调至～。商品化的试剂配制后可省略该步骤，无需校正 PH。根据 所需的培养基用途不同分别加入不同含量的琼脂， 制成半固体培养基 和固体培养基。 7）分装：（液体培养基、半固体培养基和部分固体培养基的分装可在灭菌钱也可在灭菌后） 8） ①基础培养基：一般分装于容量为 500ml 锥形瓶灭菌后备用， 以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等； ②琼脂斜面：通常在融化后分装于试管，量约为试管高度的 1/4~1/3 ，灭菌后倾斜放置。 2 v1.0 可编辑可修改 ③半固体培养基： 分装量为试管容量的 1/4~1/3 ，灭菌后直立放置。 ④液体培养基：分装量为管长的 1/5 ，灭菌后直立放置。 （9）灭菌： 分装好的培养基常用高压蒸气灭菌， 条件为，温度 121℃15~20min；含糖培养基以， 10~15min 为宜，以免破坏糖类物质；不耐高热的物质配制成的培养基，常用流通蒸气灭菌或滤过除菌。 琼脂平板制备：先将灭菌琼脂融化后冷却至 50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内（内径 75mm的平皿约 8-9ml ），水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置 4℃保存备用。 营养平板制备：先将灭菌琼脂融化后冷却至 50℃左右，以无菌操作加入 10%无菌的脱纤维羊血（临用前置 37℃水浴预温 30min），轻轻摇匀（避免产生气泡） ，倾注于灭菌平皿内（内径 75mm的平皿约 8-9ml ），水平旋转平皿， 待琼脂凝固后将平皿翻转， 置 4℃保存备用。 [ 注意事项 ] 平板的浇注：倾注培养基时，切勿将皿盖全部开启，以免空气中尘埃及细菌等微生物的落入。倾注时若培养基温度过高，则冷凝水过多，易致污染，不易分离到菌落；若温度过低，部分琼脂凝固，倾注平板表面高低不平。 可在无菌室或接种罩内倾注培养基后， 将皿盖稍开一缝隙，在紫外灯照射下待凝， 这样利于蒸气散发， 减少平板内冷凝水。倾注血液琼脂时， 由于加血时琼脂表面容易产生气泡， 倾注时适时转动锥形瓶，使气泡附于瓶壁，以减少血平板表面的气泡。 （10） 质量检查： （11） 需做无菌试验和效果试验。 3 v1.0 可编辑可修改 （12） ①无菌试验：将灭菌后的培养基置 37℃孵育 24h，无任何微生物生长为合格。 （13） ②效果试验：将已知的标准参考菌株接种于待检的培养基中，检查细菌的生长繁殖状况和生化反应是否与预期的结果相符和。 （14） 保存： （15） 经过质量检查合格的培养基注明名称，制作日期存放于冷暗处或 4℃冰箱（固体培养基应将平皿的底朝上，盖朝下或用保鲜袋包裹，以减少水分蒸发，液体培养基应直立放置，以免污染） 。 微生物的分离培养和接种技术 接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培