第八章特殊毒性及其试验与评价方法.pptVIP

第八章 特殊毒性试验及其评价;; 1．DNA与基因 DNA由脱氧核糖、磷酸及碱基组成，基本成分为四种核苷酸，形成双螺旋结构。; 基因（gene）：DNA分子中最小的完整功能单位，是生物遗传信息的携带者 基因组（genome）：细胞或生物体的一套完整单体的遗传物质;;;;;; 有丝分裂过程;;生物物种可以通过各种繁殖方式来保证世代间生命的延续，这个过程称为遗传。 遗传的稳定是相对的。 在亲子之间或子代个体之间出现不同程度的差异，这种差异称为变异。;;;突变的分类;;基因突变 一个或几个DNA碱基对的改变。 ;;;1. 基因突变;①碱基置换 指DNA序列上的某个碱基被其他碱基取代。首先在DNA复制时会使互补链的相应位点配上一个错误的碱基，即发生错误配对。这一错误配上的碱基在下一次DNA复制时却能按正常规律配对，于是一对错误的碱基置换了原来的碱基对，亦即最终产生碱基对置换或简称碱基置换。 ;②移码突变 移码是DNA中增加或减少了一对或几对不等于3的倍数的碱基对所造成的突变。;③整码突变 指在DNA中增加或减少的碱基对为一个或几个密码子。 ④片断突变 指基因中某些小片断核苷酸序列发生改变。这种损伤有时可跨越两个或数个基因。片断突变包括缺失、重复、重组、重排。;2. 染色体畸变;;容易观察到的畸变有染色单体断裂、染色体断裂、无中心粒片段、染色单体交换、双中心粒染色体、环状染色体及某些相互易位。;染色体畸变;染色体结构变异类型;在染色体上出现无染色质的区域，但该区域两端的染色体仍保持线状连接者为裂隙。;一个染色体发生一次或多次断裂而不重接，并且这些已断裂的节段远远分开，常将无着丝粒断片简称为断片。有着丝粒的部分称为缺失，缺失有末端缺失和中间缺失。;染色体两臂各发生一次断裂，其带有着丝粒的节段的两断端连接形成一个环时，称为环状染色体。;当某一染色体发生两次断裂后，其中间节段倒转180?再重接，称为 倒位。;当一个染色体发生三处断裂，带有两断端的断片插入到另一臂的断裂处或另一染色体的断裂处重接起来，称为插入。 如果此时有缺失的染色体和插入的染色体是同源染色体，且分??有一处断裂发生于同一位点，则插入将使该染色体连续出现两段完全相同的节段，此时称为重复。;两个非同源染色体断裂后，从某个染色体断下的节段接到另一染色体上称为易位。;（2） 染色体数目异常 整倍性畸变：单、三、四、多倍体 非整倍性畸变：2倍体多一条或少一条或多多条或少多条 2n-1,2n-2,… 2n+1,2n+2,… ;类型;DNA修复;致突变作用（mutagenesis）：是指外来因素特别是化学因子引起细胞核中的遗传物质发生改变的能力，而且此种改变可随同细胞分裂过程而传递。 致突变物：凡能引起生物体遗传物质发生改变的化学物质或任何环境因子，又称诱变剂。又称为遗传毒物。;;观察项目的选择;正常DNA;;;致突变试验组合的原则;以营养缺陷的突变体菌株为试验系统，观察受试物引起其回复突变的作用。 试验菌株： 鼠伤寒沙门氏菌——Ames试验 大肠杆菌——大肠杆菌回复试验 ;Ames试验原理： 检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力。 试验菌株都有组氨酸突变(his-)，不能自行合成组氨酸，在不含组氨酸的最低营养琼脂平板上不能生长。;鼠伤寒沙门氏菌原养型(his+);有点试验和掺入试验两种。应分别进行不加及加代谢活化系统的试验，常用为S9混合液，即用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆经9000g离心得到的上清液，再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等辅助因子。;; 突变型试验菌株可被各种诱变因素诱导，回复突变成野生型(his+) ，即恢复了合成组氨酸的能力，可在此平板上生长成可见菌落。　　 如果受试物处理组回变菌落数显著超过阴性对照组；并有剂量反应关系，即可判定受试物为鼠伤寒沙门菌的致突变物。;结果判断;哺乳动物细胞基因突变试验是利用啮齿类和人体外培养细胞的基因正向突变试验。 ;TK：胸苷激酶，催化胸腺嘧啶脱氧核苷＋ATP → 胸苷酸。 存在嘧啶类似物5-溴脱氧尿苷时，产生异常核苷酸使细胞死亡。 受试物存在时若细胞不死亡说明TK发生突变。;次黄嘌呤、鸟嘌呤转磷酸核糖基酶：催化次黄嘌呤＋鸟嘌呤＋磷酸核糖焦磷酸 → 核苷-5’-单磷