微生物的培养.pptVIP

提取 煎煮法: 将供试中草药各取 30 g倒入烧杯中 ,加 400 mL水 , 浸泡 30 min后煎煮。边煮边搅拌 ,煮沸后 　火煮 30 min, 滤出药液 , 共煎 3次 , 合并所得药液 , 浓缩至生药含量为 1000 mg/mL。抽滤除菌后置于 4 ℃冰箱中保存待用 微生物培养的基本程序 涂布平坂 取0.1ml菌悬液 涂布平板 37℃倒置培养 系列稀释 * * 培养基的配制—称量→溶化→调pH→分装→包扎 灭菌（高压蒸汽灭菌） 接种 固体培养基—平板划线（接种环）、稀释涂布（玻璃刮刀） 液体培养基—用接种环蘸取菌液（扩大培养） 培养 固体培养基—倒置，37℃恒温培养箱，24h左右 液体培养基—空气浴或水浴培养箱（摇床），震荡培养 固体培养基—划线的末端出现单菌落 液体培养基—培养液变浑浊 观察 废弃菌种和培养基灭菌后丢弃 划线末端出现单菌落 适当稀释度下出现单菌落 培养基的配制 1计算 2称量 3溶化 4调pH 5分装 6包扎 牛肉膏蛋白胨培养基: 每 1000mL培养基含牛肉膏 310 g、蛋白胨 1010 g、氯化钠 510 g、琼脂 20 g。 （1）灭菌： 　　使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌: 灭菌与消毒 :接种环 :培养皿 培养基 　（2）消毒： 　　使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子） 煮沸消毒法：100 ℃ 5-6min 巴氏消毒法：70-75 ℃ 30min或80 ℃ 15min 化学药剂消毒法：酒精、氯气 紫外线消毒：实验前30min 倒平板 平板划线法（接种环） 稀释涂布平板法（涂布器＼玻璃刮刀） 接种 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是一个菌落. 将菌液进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，培养。在稀释度足够高的菌液里，分散成单个细胞，经培养形成单个菌落。 稀释涂布平板法 系列稀释 将菌液进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，培养。在稀释度足够高的菌液里，分散成单个细胞，经培养形成单个菌落。 涂布 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养 在适当的稀释度下，可培养产生单菌落。 稀释涂布平板法结果 稀释涂布平板法结果的处理 涂布分离时，需要先将菌液稀释，一般稀释到10-5～10-7之间，然后取0.1mL的不同稀释度的菌液，放在培养皿的固体培养基上，再用消毒后的玻璃刮刀把这些菌液涂布在培养基平面，在适当的稀释度下，可培养产生相互分开 的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。 将每个菌落分别接种在斜面上扩大培养后，再做功能性实验。 关键技术——“涂布分离法” 1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水 得10-2 1g土壤 10-3, 10-4的菌悬液 0.5ml 稀释涂布平板法 *