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临床生化检验基础知识培训 一、 生化基础知识 1.1 生化诊断试剂盒为由一定的化学品或者酶类组成的多成分混合试剂 （Reagent），最终以水溶液的方式与待测物发生一系列化学或者生化反应， 通过 生成物或反应物中某物质的吸光度变化，测量待检测物中某种特定物质的含量。 1.2 生化诊断试剂用于检测样本，包括：人体血清（主要） 、血浆及尿液中的各 种酶类和代谢产物， 用于预测， 诊断以及治疗监测， 协助临床医生诊治疾病提供 数据参考。 1.3 按功能分为： 肝功、血脂、肾功、心肌、代谢、免疫 风湿、离子 其他。 1.4 试剂性能评价指标： 1 试剂外观 2 批间差 3 准确度 4 精密度 5 线性（灵敏度） 6 抗干扰能力（特异性） 7 稳定性 1.5 试剂检测原理（朗伯比尔定律） ：A=Kbc 式中，A 为吸光度 ;K 为吸收系数， 是与入射辐射的波长及吸收物质 的性质有关的常数 ;b 为液层厚度，单位为 cm;c 为吸收物质的浓度。当 浓度的单位为 mol/L 时，K 的单位为 L/mol ·cm，称为摩尔吸收系数，通 常用 ε 表示。摩尔吸收系数 ε 表示物质对某一波长的辐射的吸收特性。 ε愈大，表示物质对某波长辐射的吸收力愈强， 因而分光光度法测定的灵 敏度就愈高 . 1.6 理论值与实测值偏差的解释： 实测值偏离了朗伯比尔定律。 偏离 Lambert-Beer 定律的因素： 1 复合光对 Beer 定律的偏离： 吸收定律要求入射光为单色光， 而分光 光度计单色光的纯度主要决定于色散元件及光路设计，即使高精度的 仪器，也得不到纯单色光，而是波长宽度的复合光，其结果导致偏离 Lambert Beer 定律。 2 杂散光的影响：杂散光 (stray light) 是进入检测器待测波长以外 的光。主要来源于仪器色散元件表面的散射、单色器内壁尘埃等。 3 狭缝宽度的影响：单色器设有进、出口狭缝，狭缝愈窄，单色光愈 纯，吸光度增加，但辐射能减小，对弱吸收带的测量有一定影响。定 性分析时，为提高分辨能力常采用较小的狭缝，而定量分析时，在灵 敏度允许的情况下，宜采用较大狭缝。当出、入射狭缝宽度相等时， 狭缝宽度引起的误差最小。 4 非吸收作用引起的误差： 1. 散射效应： 光吸收定律只适用于均匀的吸收体系， 如待测溶液是混 浊的，当光通过时，将产生散射效应。其结果使光通过吸收物质的光 程不固定，散射光的一部分和透射光一起进入检测器， 导致偏离 Beer 定律。因此，免疫比浊法常用多点校准来做标准曲线。 2. 荧光效应：分子吸收辐射能后产生的激发态分子以重新发射辐射 的方式回到基态而发射荧光。由于多数显色体系荧光效应很小，而且 荧光发射是各向同性，只有一部分沿透射光方向进入检测器，使测量 吸光度偏低。一般情况下，荧光效应对分光光度法产生的影响较小。 目前，多数光度计设有两个样品室，对有荧光试样可置于离检测器较 远的样品室，或在光路中