14基因诊断与基因治疗.pptx

第二十一章 基因诊断与基因治疗;第一节 基因诊断;二、基因诊断的原理及方法;（1）DNA诊断 1）限制性片段长度多态性 2）等位基因特异的寡核苷酸探针杂交 （allele-specific oligonucleotide probe, ASO probe） 3）单链构象多态性（SSCP） 4）DNA序列分析 （2）RNA诊断 1）RNA印迹（Northern blot） 2) RT-PCR;1）限制性片段长度多态性 —基因连锁分析;6;7;8;9;10;11;12;13;14;15;16;17;18;19;20;;22;23;24;25;26;三、基因诊断的应用;3 恶性肿瘤 4 法医学中应用;（1）DNA指纹分析（DNA fingerprinting） 可变串联重复序列 ? 小卫星DNA （variable number of tandem repeat, VNTR）;; 第二节 基因治疗的基本概念和 基本策略 一 基因治疗（gene therapy）的概念 1、背景与历史 疾病的分子生物学了解 ???新技术新方法（特别是重组DNA）的迅速发展 ;? 1989年5月28日第一个基因标记计划 （TIL-NeoR） 1990年9月 11日第一个基因治疗计划 （ADA-SCID）;???? 1995年NIH组织 Orkin 、Motoksy对 头5年基因治疗评估 3点 建议： 发展载体技术 疾病的分子机制 动物模型 成立3个国家实验室 2000年2月 532个计划，3400余个病人 ? ;病种：恶性肿瘤 62.2% 遗传性疾病 13.3%  AIDS 6.8% 心血管疾病 6.8% 其他 1.3 %; 2、定义 基因角度： 正常或有功能的基因置 换或增补缺陷基因。 治疗角度： 新的遗传物转移到某个 体获治疗效果。 ;3、方式 基因矫正和置换: 同源重组 基因增补: ADA、 血友病 基因封闭: myc基因过度表 达，反义抑制 活化前体药物基因治疗：;;4、导入方式  ex vivo 基因转移 in vivo 基因转移;;1、??????? 目的基因的获得方法 1）? 真核基因组DNA文库中 目的基因的克隆 2）? cDNA文库中目的基因的  克隆 3）? ??工合成基因片段 4）? PCR法筛选扩增目的基因;1、 外源基因的要求 1）? 含信号肽的cDNA，序列 正确 2）? 必要的调控元件（顺式 作用元件 启动子、增强 子、静止子） ;3）? 外源基因进入细胞核转录， 再转移至细胞浆，间隔序  列（内含子），剪接信号 （SA,SD）PolyA信号，核  内转录因子4）? 翻译的起始密码子、终止 密码子、内核糖体进入位 点（IRES）元件5）? 外源基因的丢失、失活、甲基 化;4、基因治疗的靶细胞（target cell） 1）? 生殖细胞 全世界受严格控制 2） 体细胞 选择的标准： A、 容易取出和移植 B、?? 容易体外培养 C、??? 目的基因高效导入 D、????细胞寿命长 ;常用靶细胞； 自体、 同种异体、 异种、 淋巴、骨髓、皮肤、肝、肌、 肿瘤细胞等;;基因导入的方式： ex vivo——