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第二十一章 基因诊断与基因治疗;第一节 基因诊断;二、基因诊断的原理及方法;(1)DNA诊断
1)限制性片段长度多态性
2)等位基因特异的寡核苷酸探针杂交
(allele-specific oligonucleotide probe, ASO probe)
3)单链构象多态性(SSCP)
4)DNA序列分析
(2)RNA诊断
1)RNA印迹(Northern blot)
2) RT-PCR;1)限制性片段长度多态性
—基因连锁分析;6;7;8;9;10;11;12;13;14;15;16;17;18;19;20;;22;23;24;25;26;三、基因诊断的应用;3 恶性肿瘤
4 法医学中应用;(1)DNA指纹分析(DNA fingerprinting)
可变串联重复序列 ? 小卫星DNA
(variable number of tandem repeat, VNTR);; 第二节 基因治疗的基本概念和
基本策略
一 基因治疗(gene therapy)的概念
1、背景与历史
疾病的分子生物学了解
???新技术新方法(特别是重组DNA)的迅速发展
;? 1989年5月28日第一个基因标记计划 (TIL-NeoR) 1990年9月 11日第一个基因治疗计划 (ADA-SCID);???? 1995年NIH组织 Orkin 、Motoksy对 头5年基因治疗评估
3点 建议:
发展载体技术
疾病的分子机制
动物模型
成立3个国家实验室
2000年2月 532个计划,3400余个病人
?
;病种:恶性肿瘤 62.2% 遗传性疾病 13.3% AIDS 6.8% 心血管疾病 6.8% 其他 1.3 %; 2、定义
基因角度: 正常或有功能的基因置
换或增补缺陷基因。
治疗角度: 新的遗传物转移到某个
体获治疗效果。
;3、方式 基因矫正和置换: 同源重组 基因增补: ADA、 血友病 基因封闭: myc基因过度表 达,反义抑制 活化前体药物基因治疗:;;4、导入方式 ex vivo 基因转移 in vivo 基因转移;;1、??????? 目的基因的获得方法 1)? 真核基因组DNA文库中 目的基因的克隆 2)? cDNA文库中目的基因的 克隆 3)? ??工合成基因片段 4)? PCR法筛选扩增目的基因;1、 外源基因的要求 1)? 含信号肽的cDNA,序列 正确 2)? 必要的调控元件(顺式 作用元件 启动子、增强 子、静止子) ;3)? 外源基因进入细胞核转录, 再转移至细胞浆,间隔序 列(内含子),剪接信号 (SA,SD)PolyA信号,核 内转录因子4)? 翻译的起始密码子、终止 密码子、内核糖体进入位 点(IRES)元件5)? 外源基因的丢失、失活、甲基 化;4、基因治疗的靶细胞(target cell)
1)? 生殖细胞
全世界受严格控制
2) 体细胞
选择的标准:
A、 容易取出和移植
B、?? 容易体外培养
C、??? 目的基因高效导入
D、????细胞寿命长
;常用靶细胞; 自体、 同种异体、 异种、 淋巴、骨髓、皮肤、肝、肌、 肿瘤细胞等;;基因导入的方式: ex vivo——
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