的末端抑制谷氨酸诱导细胞凋亡.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘要【目的】 摘要 【目的】 本研究以死亡相关蛋白激酶(death．associated protein l(inase，DAPK)为靶 点，构建一个含有DAPK的C末端编码序列的质粒，并将此重组质粒转染 SH．SYSY细胞，并观察稳定表达DAPK蛋白C一末端多肽(DAPK carboxylic terminal peptide，DCTP)的SH-SY5Y细胞抵抗谷氨酸诱导凋亡能力，检测DAPK 表达水平以及磷酸化水平，初步探究DCTP抑制DAPK功能的机理，为利用DCTP 治疗神经元凋亡性脑疾病提供理论依据。 【方法】 以DAPK的cDNA为模版，通过PCR扩增出DCTP核酸片段，定向连接到 融合质粒pEGFPNl上，把重组质粒转染到SH—SY5Y细胞中，RT-PCR鉴定转染 效果，荧光显微镜下观察DCTP表达产物在细胞中的定位。构建表达DCTP的 真核表达质粒载体plRES2．DCTP。利用脂质体将重组质粒转染至SH．SY5Y细胞 中，同时转染空载质粒作为对照，用G418筛选细胞克隆，建立稳定增殖细胞株， RT-PCR鉴定DCTP表达。用不同浓度的谷氨酸作用于SH—SY5Y细胞，观察谷 氨酸对细胞生长的影响；然后选择适合浓度的谷氨酸，分别诱导转染空载plRES2 质粒的SH—SY5Y细胞和转染plRES2．DCTP的细胞，观察两组细胞对谷氨酸