6.总论第II部-遗传变异的创造-第六章-染色体操作2.pdf

111 第六章 染色体操作 2 6-1 多倍体 6-2 单倍体 6-3 非整倍体 6-4 染色体结构变异 3 6-1 多倍体（续） 应用秋水仙碱诱发植物多倍体，是否成功与下列因素有关。 1. 处理对象 　通常以植物茎端分生组织和发育初期幼胚为主要对象，花 分生组织也可作为处理对象。不同材料，处理时间也不同， 一般处理24h以上，浓度低处理时间长，浓度高处理时间短。 秋水仙碱仅对分裂中期的细胞起作用。试验时需了解被 处理细胞的分裂周期，处理时间过长，经过不止一个分裂周 期，细胞内的染色体加倍次数在1次以上。 例如据Levan(1938) 观察，洋葱根尖处理7~30 min，即 有少数细胞由2X变为4X；处理时间延长到1~2 h，4X细胞增多； 处理72 h，最高可出现32X的细胞。 处理时间过短，只有少数细胞变为四倍体，由于二倍体 细胞生长较快，四倍体细胞不易增殖，导制诱导无效。处理 种子时间为24~48 h ，处理已发芽的种子或幼苗应适当缩短时 间。 幼嫩的生长点可用点滴、涂布或用含有溶液的脱脂棉包 围等方法。单子叶植物的生长椎被幼叶包围，可用注射及切 除幼叶等方法。 2.诱导浓度 　　通常处理水溶液浓度为0.01%-0.5%,以0.2%左右浓度应用 最多。处理幼嫩的组织、器官、种苗、萌动的种子比处理干 。 。 种子浓度小 浓度过大，易导制细胞死亡 3.处理时的温度 　适宜的温度对于秋水仙碱的诱导效果极为关键 。一般的处 理温度为18-25℃之间。低温阻碍细胞分裂，温度过高则对细 胞有损害，可使细胞核分裂成碎片，有丝分裂不能进行。 例如，山薤（Allium japonicum ）球根在秋水仙碱浓度 为0.04%~0.20%，处理时间48 h情况下，温度低于20℃，多倍 体发生缓慢，低于10℃时则难以发生。 4. 处理方式 　　秋水仙碱在使用时，可视不同的需要配成不同浓度的剂 型。常用的剂型有下列几种： （1）水溶液 这是最常用的剂型。配制时，可将秋水仙素直接溶于冷 水中，或以少量酒精为溶剂，而后再加冷水。一般是先配成 浓度高的母液，使用时再稀释到所需的浓度。 秋水仙素溶液宜贮藏于有色玻璃瓶内，防止阳光直射， 最好置于暗处，盖紧塞子，避免与空气接触。用过的溶液过 滤后仍可使用，只是浓度有所改变。 、琼脂或凡士林 （2）制成羊毛脂膏 　　 这种剂型适宜处理生长点或幼芽。以精制羊毛脂 (Lanolin，淡黄色软膏，熔点40度，不溶于水)作基质，将秋 水仙素粉末直接加进羊毛脂中搅拌均匀。 或者用小型研钵将一定量的羊毛脂放入，而后将秋水仙 素溶液缓慢加入，充分混合。也可用0.8%的琼脂溶液加入秋 水仙素溶液，混合后凝固。 除上述2种方法外，还可将秋水仙素溶解于低浓度酒精 及10%的甘油与水中。 5. 处理方法 　　包括浸渍法、棉花球滴浸法、涂抹法、注射法、药剂-培养基 法等。可根据不同情况选用不同方法。 （1）浸渍法 　　此法适用于处理种子、枝条、幼苗。 处理种子时，可将浸泡过的种子或干种子放在铺有滤纸 的培养皿或平底盘中，然后注入一定浓度（0.01%-1.0%）的 秋水仙素溶液，加盖避免蒸发，置于培养箱中保持适宜的发 芽温度。 发芽的种子处理数小时至数天（视种子种类定）。秋 水仙素能阻碍根的发育，最好在发根前处理完毕，处理后 用清水冲洗干净再播种或砂培。 处理幼根或枝条时，可将幼根分生组织或幼嫩枝条浸入秋 水仙素溶液1-2天，而后清水彻底冲洗。为防止芽