专题5课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段(上课).pptVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应 扩增DNA片断;㈠.DNA分子的结构;一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。;O;2021/5/18;4.DNA分子的双螺旋结构;㈡.DNA的复制;⑴.边解旋边复制(过程）;参与的组分;（三） PCR(多聚酶链式反应）;2021/5/18;3、 PCR原理;2021/5/18; 高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。;① PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸;1、PCR仪;2、微量离心管;1.准备;将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。;⑴.变性（模板DNA解旋）;靶序列;靶序列;靶序列;靶序列;循环次数; PCR 循环的结果;PCR技术高度灵敏，为了避免外源DNA等因素的污染而造成干扰实验，PCR操作时要注意做到：;㈠理论上DNA扩增数目的计算;⑵.对照调零;