酶生产与制备.pptVIP

第三章 酶的生产与分离纯化;酶的生产方法;三种生产方法的比较： 提取分离法：直接从各种动植物材料中提取所需要的酶。在早期的酶学研究中，该方法应用较多。该生产方法操作起来比较简单（纯粹的蛋白分离纯化过程）；缺点是材料较难收集，生产工艺受到季节的限制。 常见的代表如：木瓜蛋白酶、凝乳蛋白酶 微生物发酵：利用微生物发酵的方法合成酶。操作过程相对较复杂（包括酶的发酵及分离纯化两个过程）；但是生产工艺容易控制，可以实现大规模生产。 目前工业上应用的酶绝大多数??该方法生产。 化学合成法：利用化学的方法合成酶的过程。成本非常高，而且合成的酶对分子量大小有要求。;3.1 酶的发酵生产;(4) 可以采用微电脑等新技术，控制酶发酵生产过程，生产可连续化、自动化，经济效益高。 (5) 可以利用以基因工程为主的现代分子生物学技术，选育菌种、增加酶产率和开发新酶种。因此，下面将主要介绍微生物发酵法产酶的一般原理和工艺。 ;3.1.1 产酶微生物;常见产酶微生物;(1) 大肠埃希氏杆菌，简称为大肠杆菌，是最为著名的原核生物。;应用： 大肠杆菌能作为宿主供大量的细菌病毒生长繁殖 大肠杆菌也是最早用作基因工程的宿主菌 工业上生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和 制备天冬氨酸、苏氨酸及缬氨酸等. ;(2) 醋酸杆菌（Acetobacter） ;(3)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） ;(4) 根霉(Rhizopus) ;(6)曲霉(Aspergillus) ;3.1.2 酶的发酵工艺条件与控制;3.1.2.1 培养基 培养基的营养成分是微生物发酵产酶的原料，主要是碳源、氮源，其次是无机盐、生长因子和产酶促进剂等。 ;各种生物对营养的需求;（1）碳源 作用：碳素是构成菌体成分的主要元素；也是细胞贮藏物质和生产各种代谢产物的骨架；还是菌体生命活动的能量的主要来源。 常用碳源：常用碳源：糖类、醇类、脂类、有机酸、烃类、蛋白质及其降解物。 工业上应用的碳源主要是一些农副产品：如甘薯、麸皮、玉米、米糠等淀粉质原料。此外，以石油产品中12～16碳的成分来作碳源，如以某些嗜石油微生物生产蛋白酶、脂酶，也已获得成功。;不同的细胞对各种碳源的利用差异很大，所以在配制培养基时应根据不同细胞的不同要求而选择合适的碳源（即碳源的合理选择）。另外，选择碳源除考虑营养要求外，还要考虑酶生物合成的诱导作用和是否存在分解代谢物阻遏作用。尽量选用具有诱导作用的碳源，尽量不用或少用有分解代谢物阻遏作用的碳源。 例如，α－淀粉酶的发酵生产中，应该选用有诱导作用的淀粉作为碳源，而不用对该酶有分解代谢物阻遏作用的果糖作为碳源。;（2）氮源 氮是生物体内各种含氮物质，如氨基酸、蛋白质、核苷酸、核酸等的组成成分。 酶制剂生产中的氮源主要有有机氮源和无机氮源两种，常用的有机氮源有：豆饼、花生饼、菜籽饼、鱼粉、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、多肽、氨基酸等；无机氮源有：(NH4)2SO4、NH4Cl、NH4NO3、(NH4)3P04、尿素等。;不同的细胞对各种氮源的要求各不相同，应根据要求进行选择和配制。一般来说，动物细胞要求有机氮，植物细胞主要要求无机氮。多数情况下将有机氮源和无机氮源配合使用才能取得较好的效果。例如黑曲霉酸性蛋白酶生产，只用铵盐或硝酸盐为氮源时，酶产量仅为有胨时的30%。只用有机氮源而不用无机氮源时产量也低，故一般除使用高浓度有机氮源外尚需添加1%~3%的无机氮源。;（3） 碳氮比 在微生物酶生产培养基中碳源与氮源的比例是随生产的酶类、生产菌株的性质和培养阶段的不同而改变的。 一般蛋白酶 (包括酸性、中性和碱性蛋白酶) 生产采用碳氮比低的培养基比较有利，例如黑曲霉3.350酸性蛋白酶生产采用由豆饼粉3.75 %、玉米粉0.625%、鱼粉0.625%。NH4Cl 1%、CaCl2 0.5%、Na2HP04 0.2%、豆饼石灰水解液10%组成的培养基； ;淀粉酶(包括α－淀粉酶、糖化酶、β－淀粉酶等)生产的碳氮比一般比蛋白酶生产略高，例如枯草杆菌TUD127α－淀粉酶生产采用由豆饼粉4 %、玉米粉8 %、Na2HP04 0.8%、 (NH4)2SO4 0.4%、CaCl2 0.2%组成的培养基。而在淀粉酶生产中糖化酶生产培养基的碳氮比是最高的。以上是蛋白酶和淀粉酶生产培养基碳氮比的一般规律，但是由于菌种很多而其性质各异。很难说都是符合上述规律的。;在微生物酶生产过程中，培养基的碳氮比也因培养过程不同而异。例如种子培养时，为了适应菌体生长繁殖的需要，要求提供合成细胞蛋白质的氮多些，容易利用的氮源的比例大些，种子培养基的碳氮比一般要比发酵培养基低些。发酵时，不同发酵阶段要求的碳氮比也是不同的。例如在枯草杆菌BF－7658生产α－淀粉酶的发酵过程中，发酵前期要求培养基的