基因的重组与转移.pptxVIP

;外源DNA;第一节 重组DNA分子的构建;二、基因重组的考虑因素;三、表达载体DNA理想的酶切位点;（一）粘性末端的连接;1. 两段DNA的连接;2. DNA片段与载体的连接;;(二)平齐末端（blunt end）的连接;（1）同聚加尾法 ;;用T4 DNA连接酶连到平端DNA上，然后再用酶切，形成一个人工粘性末端。; ; ;④缺点：;（3）DNA接头 (adapter)连接法;;;接头与接头会彼此以粘性末端接在一起，影响与DNA片段的连接。;5‘p-GATCCCGG-OH HO-GGCC-P;;(三)PCR产物的连接;引物1;GCTAGCCGG;带酶切位点的PCR产物;2. 与T载体直接连接;;(四)DNA体外连接应注意的事项;EcoRI;2. DNA插入的方向正确;3. 插入基因的开放阅读框（ORF）正确;4. 防止载体自身环化连接;（4）使用同尾酶产生的粘性末端连接方法;1. 载体自身环化连接（能存活）;17;1. 目的;使用丧失了限制体系的大肠杆菌； 具有与重组体互补的遗传性状； 重组整合缺陷型。;;用低渗CaCl2溶液在低温时处理快速生长的细菌，此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面，促进细胞对DNA的吸收。 ;4. 制备过程;二、重组DNA导入大肠杆菌;2. 转化率;4. 转化方