基因工程基本操作程序.pptxVIP

第二节 基因工程的原理和技术;1 获得人的胰岛素基因 ——目的基因的获取①;获取;;一、目的基因的获取（获得人的胰岛素基因）;1、从基因文库中获取目的基因： (通常在未知DNA序列的情况下);cDNA文库的建立：;基因文库 ： 基因组文库：包含该生物的所有基因。 cDNA文库：包含该生物的部分基因。 一般针对基因的编码区而建立。;2、体外直接合成目的基因 (通常在已知DNA序列的情况下) ① 利用PCR技术扩增目的基因;变性;A PCR全称为_________________??? ;由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列;???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????;;重组DNA分子一定能使目的基因表达吗？; 重组DNA分子的组成： 目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点 参与的工具酶： 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 ;三、将重组DNA导入受体细胞 （将重组质粒导入到大肠杆菌中）;土壤农杆菌法;例：用携带外源基因的农杆菌Ti质粒转化植物细胞，使外源DNA与植物染色体DNA整合，通过培养形成愈伤组织，最后发育成转基因植物。;目的基因导入动物细胞;例：从转基因羊的羊奶中提取出治疗心脏病的药物tPA。同样方法可获得疫苗、生长激素等。;;;互补显色筛选法：原核;营养缺陷性筛选法： 载体分子携带营养成分（氨基酸，核苷酸）的生物合成基因，受体细胞基因突变，不能合成营养物质。两者构成营养缺陷。 在缺少营养物质的培养基上受体细胞不存活，存活的是导入成功的受体细胞。 ;五、目的基因的表达（大肠杆菌能合成人的胰岛素吗）;2、个体水平检测：检测性状;;以大肠杆菌为宿主菌进行基因的克隆 将目的基因克隆到大肠杆菌细胞中的操作步骤： 1．获得目的基因（和质粒载体）； 2．形成重组质粒； 3．制备感受态细胞（Ca2+），用重组质粒转化大肠杆菌细胞； 4．培养大肠杆菌，让重组质粒及外源目的基因形成大量拷贝； 5．筛选含重组质粒的大肠杆菌细胞，进行检查或鉴定。;;获取;获取;由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列;重组DNA分子一定能使目的基因表达吗？;重组DNA分子一定能使目的基因表达吗？;