淡紫拟青霉外源基因拷贝数检测.pptVIP

DNA转移的效率较难判断，只有在转膜结束后，通过EB染胶，及分子杂交才可以鉴别效率高低，但已无补救措施，因此，每一步应严格操作 转膜时间（duration of transfer，12hrs） 取决于毛细吸附系统 胶厚度(5mm)及浓度(1%) ＤＮＡ大小：ＤＮＡ分子量大小决定时间长短，部分去嘌呤减小ＤＮＡ，碱转２hrs大部分结合到膜。 尼龙膜（带正电荷的）具有较大的DNA结合容量，它能够吸附变性DNA，核酸能够不可逆结合在尼龙膜上。尼龙膜两边均有同样吸附DNA功能(无论用哪边均可以经久耐用，可反复利用10次以上次），经毛细吸附作用，把DNA从凝胶上转到膜上。DNA转到膜上是复制胶上的带型，再在80-100℃真空干燥2 hrs，即可固定DNA。 操作步骤 制胶：注意琼脂糖的质量，胶的浓度，厚度（5mm）及均一性。一般大电泳槽配制250ml 0.8%琼脂糖凝胶； 制样，点样：DNA样品中指示剂量稍多 电泳：一般1-1.5V/cm的电压， 使DNA迁移到适当距离，一般指示剂约移动10-11cm (大电泳槽：40V×12-15hrs，小电泳槽30V×4-5 hrs) （一）0.8%琼脂糖电泳 （二）转膜前的准备 每组2个合适大小的水盘 1根玻璃棒，1块铲胶板，1个切胶刀 2张搭盐桥的滤纸（13cm×35cm) 1张合适大小的尼龙膜(7cm×10cm) 2张比尼龙膜稍大的滤纸(7