蛋白表达纯化专题外源基因在原核生物中的表达.pptVIP

实验室交流报告之 The key of Prokaryotic protein expression and purification 外源基因在原核生物中的表达： 表达载体 常见启动子 λpL启动子： 热诱导启动子 trp启动子： 化学诱导启动子 trc启动子： trp+lac杂交启动子 tac启动子： trp+lacUV5杂交启动子； pGEX（Pharmacia）、pMal（NEB） T7/T7lac启动子： pET（Novagen）、pEASY-E1/E2（Transgen） T7启动子 表达载体 融合标签 常用于蛋白检测与纯化。 有时也可增加蛋白可溶性、将蛋白运转至特定位置。 N端融合：易于构建，终止密码子来自载体/基因 表达量高 提前终止会干扰纯化 二级翻译起始不影响纯化 常用融合标签 His·Tag pET系统 GST·Tag pGEX系统 MBP·Tag pMal系统 C端融合：构建时注意避免移码 基因不能自带终止密码子 提前终止不影响纯化 二级翻译起始会干扰纯化 表达载体 系统名称 公司 启动子 抗性 常用标签 特点 pGEX GE(Pharmacia) tac Amp GST·Tag 可溶性表达，纯化难以控制，谷胱