心肌细胞动作电位3.ppt

心肌细胞动作电位;心肌细胞动作电位是心肌细胞兴奋的标志，记录心肌细胞动作电位对研究心肌细胞电生理特征和活动规律以及各种内外环境变化及药物对心脏活动的影响具有重要意义。 ;细胞内记录——准确记录到单个心肌细胞动作电位 细胞外记录——是多个心肌细胞电活动的复合反映;一、细胞内记录 ;（一）蟾蜍心室肌细胞动作电位 ;(1)固定玻璃微电极;固定玻璃微电极的优缺点;在已充灌3 M KCl溶液的玻璃微电极距尖端1 cm处，用小细锉刀轻轻锉一下，仔细将其折一下，将一直径约30 μm长约20 cm的细银丝插入微电极，使电极尖牢固附着在银丝上。 这种电极在插入心肌细胞后可以随心肌的收缩而移动，不易脱离心肌纤维，易于记录到稳定重复的动作电位，对记录在体跳动的心肌细胞动作电位尤其适用。; 2. 制备标本：用探针破坏蟾蜍脑和脊髓后，仰卧位固定在蛙板上，打开胸腔和心包膜，取出心脏放入任氏液中，剪开心室腔，把心室肌平整铺开，并用三根小钢针将心室肌固定在标本槽的硅胶橡皮小板上，标本槽内的任氏液液面要略高于标本。 3. 刺激标本：将一对刺激电极轻轻接触标本，选用单脉冲刺激，波宽1 ms，刺激强度固定在略大于阈刺激，以每给一次刺激引起心室肌发生一次收缩为宜。 ;4.连接仪器：将微电极经微电极放大器与示波器或生理数据记录分析系统相连，选择适当的参数。 ;9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。*** 10、低头要有勇气，抬头要有低气。**** 11、人总是珍惜为得到。***** 12、人乱于心，不宽余请。**** 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。***** 14、抱最大的希望，作最大的努力。**** 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。***** 16、业余生活要有意义，不要越轨。*** 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。****;5. 引导电位：在解剖显微镜下，调节微电极操纵器使微电极缓缓插入心肌细胞，一旦微电极的尖端插入心肌细胞内，可见基线水平突然下降，稳定于－80～－90 mV水平，即静息电位。 给予心肌细胞一次阈上刺激，即可观察到心肌细胞动作电位，持续时间约为500-600 ms，分为0、1、2、3和4期。记录到理想的动作???位后，测量动作电位的各个参数以及动作电位不应期等。 ;心肌细胞跨膜电位的测量指标： 静息电位(RP)或最大舒张电位(MDP)、动作电位振幅(APA)、动作电位0期最大上升速率(Vmax)、动作电位时程(APD10、APD50、APD90、APD100)、动作电位传导时限(CT)、有效不应期(ERP) 。; ① 实验过程中尽量减少震动和碰撞实验装置，以免微电极穿透心肌细胞或脱落； ② 安装微电极和引导动作电位时，要特别注意避免折断微电极尖端，如尖端折断应更换微电极； ③ 插入微电极的部位应选用心肌收缩时波动幅度较小的区域。 ;（二）豚鼠心室肌细胞动作电位 ;2021/5/7;二、 心肌细胞外单相动作电位记录 ;Korsgren等(1964) ;Franze和Miller等(1980);(一) MAP形成原理 ;(二) 记录电极 ;1．心内膜电极;尖端为一对银-氯化银电极，位于顶端的探查电极表面凸出呈光滑球形，直径l mm，嵌入一层环氧水泥之中，直接与心脏外膜接触。 参考电极距尖端5 mm，探头内有弹簧装置，在参考电极和探查电极之间及参考电极与心外膜之间都配有一柔软柱形浸有0．9％生理盐水的泡沫海绵。 ;1．心内膜MAP记录： 插电极导管之前，将消毒好的电极置入生理盐水中浸泡l小时，使之短路以平衡半细胞电位(half-cell potentials)，减少记录过程中图形直流电漂移。 记录人体MAP应遵循无菌操作，在X线下监视由股静脉或股动脉将电极导管插入右心室或左心室。导管尖端紧贴心内膜，可记录到10～50 mV的MAP，通常数分钟后MAP的幅度及基线才能稳定下来，在同一部位可记录长达3小时。;2．心外膜MAP记录： 将消毒好的电极置入生理盐水中浸泡l小时。 按照无菌操作常规在心外膜安放电极，要尽量避开血管、疤痕组织和脂肪组织。 先将其纵轴调至与心外膜记录部位相垂直的方向，然后再与心外膜接触并缓缓下压，以不造成心脏明显位移为度。 一般经过3～5 min MAP稳定后就可开始记录。 ;3. 注意事项： （1）保持电极对心肌的适当压力： 压力过大→心脏移位、影响泵血、基线漂移； 压力过小→MAP幅值变小或不稳定 采用高弹性的导管并细心安置电极可使之随心脏的舒缩不断活动，并保持稳定的接触压力。 （2）维持心外膜适当的湿润程度： 如果心包液过多或心脏表面的生理盐水过多可使心外膜表面的电阻下降，MAP幅值减小。;（3）实验过程中