单个核细胞的分离.pptVIP

单个核细胞的分离;【原理】 人外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，本次实验采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞。 红细胞和多形核细胞比重较大，约为1.092，血小板约为1.032，单个核细胞比重约为1.075。因此，本实验利用一种比重为1.077等渗的聚蔗糖-泛影葡胺分离液作密度梯度离心，离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布。将单个核细胞层取出，经洗涤后即可用于细胞免疫的某些试验。;【步骤】 1.取外周静脉血2ml，注入预先加有肝素的离心管中，混匀，再加入等量生理盐水，混匀。 2.另取一支离心管，加入2ml淋巴细胞分离液，并倾斜45°角，用毛细吸管将已稀释的血液（约4 ml）在距分离液界面上1cm处沿试管壁缓慢加至分离液上面，二者之间有一明显界面。 3.2000r/min离心20min。离心后，管内可分为以下四层：上层为血浆、血液稀释液及绝大部分血小板；下层为红细胞及粒细胞；中层为细胞分离液；分离液与血浆交界部位混浊的灰白色层即为单个核细胞层。（见下图）;【步骤】 ;【步骤】 4.用毛细吸管轻轻插到灰白色层，沿试管壁周缘吸取该层单个核细胞，移入另一试管。 5.加5倍以上体积生理盐水，混匀，1500r/min离心10min，弃上清。以1ml生理盐水将细胞重悬。 6.细胞计数：（本步骤为选做） 取1滴细胞悬液置血细胞计数板内计数，一般健康成