第四章微生物生长繁殖及其控制.pptVIP

5、微生物生长;一个微生物细胞;群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖;首先将待分离的样品进行连续稀释,目的是得到高度稀释的效果,使一支试管中分配不到一个微生物.如果经过稀释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物. 这种方法适合于细胞较大的微生物.;②平板划线分离法（Streak Plate）;③倾注平板法（Pour Plate）;④平板涂布分离法（Spread Plate）;⑤选择性培养分离法;⑥单细胞（单孢子）分离法;⑦膜过滤法;单位时间里微生物数量或生物量（Biomass）的变化;5.1.2.1 以数量变化对微生物生长情况进行测定;采用培养平板计数法要求操作熟练 、准确，否则难以得到正确的结果：;(2)膜过滤培养法;第四章微生物生长繁殖及其控制;(3) The most probable number method（液体稀释法）;(4)显微镜直接计数法;2）其它方法：;5.1.2.2 以生物量为指标测定微生物的生长;比浊法;(2)重量法;3、 生理指标法;生理指标法;☆无分支单细胞微生物主要包括细菌和酵母菌， 其群体生长是以群体中细胞数量的增加来表示的， ☆ 由一个细胞分裂成为两个细胞的时间间隔称为世代，一个世代所需的时间就是代时（Ｇeneration time, G ），代时也就是群体细胞数目扩大一倍所需 时间，有时也称为倍增时间。;★指数生长可以用下式表示： b = B×2n B, b 和 t 可由试验获得， n 可通过上式计算得出，将等式两侧取对数重排后得： lgb = lgB + nlg2 lgb - lgB lgb - lgB ?? lg2 0.301 ;例如：一培养液中微生物数目由开始的12，000（ B ），经4h （ t ）后增加到49，000，000（ b ）， 这样， n ＝ (lg4.9×107－lg1.2×104）÷0.301＝12;★代时能够反应细菌的生长速率，代时短，生长速率快，代时长，生长速率慢。在很多微生物学研究中常常要了解微生物的代时。 ★代时在不同种微生物中的变化很大，多数微生物的代时为1~3h,然而有些快速生长的微生物的代时还不到10min,而另一些微生物的代时却可长达几小时或几天；另外，同一种微生物，在不同的生长条件下其代时的长短也不同；但是，在一定条件下，每一种微生物的代时是恒定的，因此它是微生物菌种的一个重要特征。;一些细菌的代时;不同温度下的代时;5.2.2 无分支单细胞微生物的群体生长曲线;生长曲线(Growth Curve)：;细菌的生长曲线一般用菌数的对数为纵坐标作图;一条典型的生长曲线至少可以分为 迟缓期，对数期，稳定期和衰亡期等四个生长时期;典型的生长曲线 （Growth curve）;迟缓期(Lag phase)：;迟缓期的特点：;迟缓期出现的原因：;对数生长期(Log phase)：;其他名称：指数期 现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。 特点： 生长速率常数最大，即代时最短 细胞进行平衡生长，菌体大小、形态、生理特征等比较一致 代谢最旺盛 细胞对理化因素较敏感 影响因素： 菌种 营养成分 营养物浓度﹡ 培养温度;应用意义： ①由于此时期的菌种比较健壮，增殖噬菌体的最适菌龄；生产上用作接种的最佳菌龄； ②发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度 ③食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期 ④是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等的良好材料。;营养物浓度与对数期生长速率和产量;稳定生长期(Stationary phase)：;应用意义： 1）发酵生产形成的重要时期（抗生素、氨基酸等），生产上应尽量延长此期，提高产量，措施如下： 补充营养物质（补料） 调pH 调整温度 2）稳定期细胞数目及产物积累达到最高。;衰亡期(Decline或Death phase)：;不同的微生物或同一种微生物对不同物质的利用能力是不同的。 有的物质可直接被利用(例如葡萄糖或NH+4等)；有的需要经过一 定的适应期后才能获得利用能力（例如乳糖或NO3-等）。前者通 常称为速效碳源（或氮源），后者称为迟效碳源（或氮源）。当 培养基中同时含有这两类碳源（或氮源）时，微生物在生长过程 中会形成二次生长现象。;由于采用活菌计数比较麻烦，并要求严格进行操作，否则不易得到 准确的结果，重复性也差，因此在实际工作中多采用分光光度计测 定OD值的方法绘制细菌的生长曲线。;5.2.3微生物生长动力学(补充）;式中?max为最大比生长