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实验九酶的基本性质 一、 目的 藤是生物催化剤，是具冇催化功能的蛋白质，生物体内的化学反应基本上都 是在酶催化卜-进行的。通过本实验了解酶催化的高效性、特异性以及pH、温度、 抑制剂和激活剂对鶴活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十 分重要的意义。 二、 原理 过氧化氛酶广泛分布于生物体内，能将代谢中产生的有害的HzO：分解成H?O 和O2,使不致在体内大量积累°其催化效率比无机催化剂铁粉高10个数量 级，反应速率可观察02产生情况。 酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异（专一）性，即一种 蔣只能对一种或一类化合物起催化作用。例如，淀粉酸和蔗糖酶虽然都催化糖昔 键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖魄只水解蔗糖.还原糖产物可用本 乃狄试剂鉴定。 通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的 差异，说明这些环境因素与梅活性的关系。 三、 仪器、试剂和材料 仪器 （1） 恒温水浴（37*C, 70*C）、沸水浴＜10*C）＞冰浴（or） （2） 试管18 X180共19支 （3） 吸管 1ml 支、2ml3 支、5ml 5 支 （4） 量筒 lOOnil 1 个 （5） 白瓷板 （6） 胶头滴管3支 试剂 （1） Fc 粉 （2） 2%HQ2 （用时现配） （3） 唾液淀粉酶溶液：先用蒸幣水漱口，再含10加左右蒸儒水?轻 轻漱动，数分钟后吐岀收集在烧杯中，用数层纱布或柵花过滤.叩得淸彻 的唾液淀粉轉原液根据酶活高低稀释50?100倍，即为唾液淀粉懈溶液。 （4） 蔗補瓣溶液：取lg鲜酵吋或干酵母放入研钵中，加入少量石英砂 和水研磨，加50ml蒸简水，静置片刻，过滤即得。 （5） 2%蔗糖溶液：用分析纯蔗糖新鲜配制。 （6） 1 %淀粉溶液：lg淀粉和0.3g NaCI,用5ml蒸孺水悬浮，慢慢倒 入60ml煮沸的蒸饲水中，煮沸Imin,冷却至室温，加水到100ml,冰箱贮 存。 （7） 0.1%淀粉溶液：O.lg淀粉，以5ml水悬浮，慢慢倒入60ml煮沸的 蒸憶水中，煮沸hnin,冷却至室温，加水到100ml,冰箱贮存。 （8） 本乃狄（Benedict）试剂：17.3g CuSO4 - 5H2O.加 100ml 蒸儒水 加热溶解，冷却：173g柠棕酸钠和100g NaCO5 - 2H:O,以600ml蒸禅 水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢加到拧檬酸钠?碳酸钠溶液中，边加 边搅匀，最后定容至1000mle如有沉淀可过滤除去，此试剂可长期保存。 碘液:3gKI溶于5ml蒸馆水中,加lg),溶解后再加295ml水, 混匀贮存于棕色瓶中。 磷酸缓冲液： A 液：0.2 mol / L Na2HPO4 称取 28.40g Na2HPO4 (或 71.64g Na2HPO4 ? 12H：O)溶于 1000ml 水中。 B液：O.lmol / L柠檬酸 称取21.01g柠檬酸(CbHq? ? H:O)溶于1000ml水中。 Ph5.0 缓冲液：10.30ml A 液十 9.70ml pH7.0 缓冲液：16.47ml A 液十 3.53ml Ph5.0 缓冲液：19.45ml A 液十 0.55ml 1%CuSO4 - 5H.O 溶液. l%NaC 1 溶液” 材料 每组约0.5 cm的马铃薯方块(生、熟)。 四、操作步骤 1.酶催化的高效性 取4支试管，按下表操作: 操作项目 管 号 1 2 3 4 2%H202(ml) 3 3 3 3 生马铃薯小块(块) 0 0 0 熟马铃碧小块(块) 0 2 0 0 铁粉 0 0 一小匙 0 现象 解释实验现象 2.酶催化的专一性 取6支干净试管，按下表操作: 操作项目 管 号 1 2 3 4 5 6 1 %淀粉(ml) 1 1 0 0 1 0 2%蔵格(ml) 0 0 1 1 0 1 唾液淀粉酶原液(ml) 1 0 1 0 0 0 蔗植的溶液mil) 0 1 0 1 0 0 蒸惚水(ml) 0 0 0 0 1 1 酶促水解 播匀，37C水浴中保温10min 木乃狄试剂(ml) 务2ml  摇匀.沸水浴中加热5-10min 现象 解释实验现象 3.温度对陋活力的影响 取3支试管，按下表操作: 操作项目 管 号 1 2 3 唾液淀粉的溶液 1 1 1 PH7.0磷酸缓冲液(ml) 2 2 温度预处理5min 0C 37C 70,C 1 %淀粉溶液(ml) 2 2 2 摇匀，保持芥自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反 应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色(只有碘液的 颜色)，立叩取岀所有试管，流水冷却5min,各加1滴碘液，混匀。观察并记录 各管反应现象，解释之。 pH对酶活力的影响 取3支试管，按下表操作: